Herstellung des Schiffschen Reagenzes. Histochemischer Nachweis von Polysacchariden

SCHIFF REAKTIV

Wässrige Lösung von Fuchsinschwefellösung (Formen I oder II). Dient dem qualitativen Nachweis von Aldehyden. Bei der Interaktion Sh.r. Mit dem Aldehyd RCHO entsteht ein purpurvioletter Farbstoff (Form III).

Die Reaktion ist sehr empfindlich (z. B. kann 1 µg Formaldehyd nachgewiesen werden). Gleichzeitig aromatisch. Hydroxyaldehyde, von denen viele ungesättigt sind, ergeben keine Färbung. Einige (z. B.) ungesättigte Verbindungen, anorg. und org. Basen, eine Reihe hydrolysefähiger Salze und alle Verbindungen, die Schwefeldioxid oxidieren, führen zur Bildung einer rosa Farbe. Daher kann das Auftreten einer hellrosa Farbe nicht als positiv angesehen werden. Aldehydtest.
Sh.r. erhalten durch Einleiten von SO 2 in eine 0,025 %ige wässrige Fuchsinlösung bis zur Verfärbung. Bei der Bestimmung von Aldehydgruppen ist eine Vorabbestimmung erforderlich. Bringen Sie den Säuregehalt durch Zugabe zum Sh auf pH 3. to-you oder eine Puffermischung. Normalerweise wird ein Kontrollexperiment durchgeführt. Beim Erhitzen Die Fuchsin-Schwefel-Lösung kann Sie erröten lassen.
Die der Verwendung von Sh. R. zugrunde liegende Methode wurde 1864 von G. Schiff entdeckt.

Zündete.: Guben-Weil, Methoden der organischen Chemie, trans. aus dem Deutschen, 4. Aufl., Bd. 2. Methoden der Analyse, M., 1963, S. 431-32; Identifizierung organischer Verbindungen, trans. aus dem Englischen, M., 1983, S. 195-96; Mazor L., Methoden der organischen Analyse, trans. aus dem Englischen, M., 1986, S. 122-24.

I. A. Kutseva.

Chemische Enzyklopädie. - M.: Sowjetische Enzyklopädie. Ed. I. L. Knunyants. 1988 .

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- (H. Schiff; Synonym fuchsinige Säure) ein Reagenz zur qualitativen Bestimmung der Aldehydgruppe organischer Verbindungen, entdeckt von Hugo Schiff. Inhalt 1 Quittung 2 Lagerung ... Wikipedia

- (N. Schiff, 1834 1915, deutscher Biochemiker) ein Reagenz zur qualitativen Bestimmung der Aldehydgruppe organischer Substanzen, das eine Lösung von fuchsiniger Säure ist; dient dem histochemischen Nachweis von Kohlenhydraten und... ... Großes medizinisches Wörterbuch

Schiffs Reagenz- fuchsinige Säure Ein Reagenz zur qualitativen Bestimmung von Aldehydgruppen; Wird bei der Feulgen-Reaktion zum Nachweis von DNA sowie bei einer Reihe anderer Tests (auf Glykogen usw.) verwendet. [Arefyev V.A., Lisovenko L.A. Englischer Russe... ... Leitfaden für technische Übersetzer

Schiffs Reagenz Schiffs Reagenz, Fuchsschwefelsäure. Ein Reagenz zur qualitativen Bestimmung von Aldehydgruppen; Wird in der Feulgen-Reaktion verwendet bei der Identifizierung von DNA sowie bei einer Reihe anderer Tests (für... ... Molekularbiologie und Genetik. Wörterbuch.

Eine wässrige Fuchsinlösung, entfärbt mit Schwefeldioxid. In Gegenwart von Aldehyden verfärbt sich diese Lösung blau.

Schiffs Reagenz.

Was ist das?

Schiffs Reagenz ist eine Lösung, die sich chemisch mit Aldehyden verbindet und ein leuchtend rotes Produkt bildet. Streng genommen reagieren auch Ketone, können aber praktisch vernachlässigt werden. Viele Stoffbestandteile können auf diese Weise gefärbt werden. Schiffs Reagenz wird aus mit schwefliger Säure (H2SO3) behandeltem Pararosanilin hergestellt. Dies ist der Grund für die Zerstörung des Chromophors durch die Anlagerung einer Sulfonsäuregruppe an den zentralen Kohlenstoff. Schwefelige Säure entsteht durch das Auflösen von Schwefeldioxid (SO2) in Wasser.

In einigen, meist älteren Texten, wird Schiffs Reagenz auch als bezeichnet Leukofuchsin . Konsole Leuko bedeutet Weiß und bezieht sich auf den Farbverlust einer Lösung. Jedoch, Leukobase bezieht sich auf reduzierte Verbindungen und seine Farbe wird durch Oxidation wiederhergestellt. Schiffs Reagenz hat nicht die ursprüngliche Farbe von Pararosanilin. Vielmehr entsteht die neue Farbverbindung durch eine chemische Verbindung mit einem Aldehyd. Aus diesem Grund wird es heute üblicherweise als bezeichnet Schiffs Reagenz oder Fuchsschwefelsäure.

Hinsichtlich der Quelle der schwefeligen Säure scheint es keinen großen Unterschied zu geben. Denn es handelt sich einfach um in Wasser gelöstes Schwefeldioxid. Es gibt mehrere Möglichkeiten, es zu bekommen. Vier empfohlene Verfahren:

· Schwefeldioxidgas aus der Flasche wird langsam durch die Pararosanilinlösung geleitet, bis die Lösung beginnt, ihre Farbe zu ändern. Der Behälter wird dann sorgfältig verschlossen und an einem dunklen Ort aufbewahrt, normalerweise bis zum Morgen oder länger.

· Kaufen Sie eine fertige Lösung schwefliger Säure. Darin löst sich Pararosanilin ohne hohe Temperatur. Der Behälter wird dann sorgfältig verschlossen und an einem dunklen Ort aufbewahrt, normalerweise bis zum Morgen oder länger.

· Der Pararosanilinlösung werden Natrium- oder Kaliummetabisulfit oder -sulfit zugesetzt (kommerzielle Beispiele bestehen offenbar hauptsächlich aus Metabisulfit). Durch Zugabe von Salzsäure entsteht Schwefeldioxid in Lösung. Der Behälter wird dann sorgfältig verschlossen und an einem dunklen Ort aufbewahrt, normalerweise bis zum Morgen oder länger.

Der Pararosanilinlösung werden Reagenzien zugesetzt, die sich in Lösung unter Bildung von Schwefeldioxid zersetzen, wie z. B. Natriumhydrosulfit (Dithionit) oder Thionylchlorid. Der Behälter wird dann sorgfältig verschlossen und an einem dunklen Ort aufbewahrt, normalerweise bis zum Morgen oder länger.

Schiffs Reagenz sollte farblos oder sehr blassgelb sein. Pararosanilin kann jedoch andere Farbstoffe enthalten, insbesondere wenn es sich um eine Mischung aus einer basischen Fuchsinprobe handelt. Andere Farbstoffe sind normalerweise Homologe von Pararosanilin, wie Rosanilin und Magenta II, erzeugen jedoch tief bernsteinfarbene Lösungen und können Aldehyde bräunlich rot färben. Diese dunkleren Produkte können entfernt werden, indem man eine kleine Menge Aktivkohlepulver hinzufügt, die Lösung eine Minute lang schüttelt und filtriert. Manchmal schlägt diese Behandlung fehl und die Lösung bleibt braun. Wenn jedoch genügend Holzkohle hinzugefügt wird, um die gesamte braune Farbe durch Bleichen vollständig zu entfernen, kann die endgültige klare Lösung möglicherweise nur eine sehr blasse Farbe erzeugen. Dies bedeutet in der Regel, dass eine Probe basischen Fuchsins verwendet wurde, die große Mengen eines der anderen Farbstoffe enthält. Wenn möglich, kaufen Sie Proben von basischem Fuchsin, die als geeignet für Schiffs Reagenz aufgeführt sind, oder kaufen Sie Pararosanilin. Wie oben erwähnt, verbindet sich Schiffs Reagenz mit Aldehyden und erzeugt ein leuchtend rotes Produkt. In der Histologie werden diese Aldehyde an Gewebestrukturen gebunden oder daraus gebildet und nehmen eine sehr leuchtend rote Farbe an. Für alle Aldehyde im Gewebe ist der Mechanismus derselbe. Der Aldehyd kondensiert mit Schiffs Reagenz zu einer neuen Verbindung, die sich an das Gewebe bindet. Der Prozess wandelt das Chromophor um und erzeugt Farbe. Fuchsinige Säure. Schiffs Reagenz Aldehyd Reguläre Produktformel. Alternative Produktformel. Beachten Sie die umgewandelten Doppelbindungen im Produkt (rot hervorgehoben) aufgrund der Aldehydzugabe. Das neue rote Produkt ist in zwei Formeln erhältlich. Die meisten Erklärungen werden von der ersten gegeben – dies ist das Endprodukt. Einige Texte geben jedoch eine alternative Darstellung mit einem Aldehyd. In beiden Fällen besteht das gefärbte Produkt aus einem Schiffschen Reagenz, einem Aldehyd und dem Reagenz, an das der Aldehyd gebunden ist. Kiernan berichtete, dass neuere Forschungsergebnisse darauf hindeuten, dass sich das Produkt von den oben genannten unterscheidet und als Tautomer der beiden unten dargestellten Produkte vorliegt. Um Reagenzien vom Schiff-Typ herzustellen, können andere Farbstoffe verwendet werden. Sie werden oft als bezeichnet Pseudo-Schiff Reagenzien. Sie sind in der Regel gefärbt und nicht vollständig gebleicht, obwohl Farbe und Klarheit der Lösung häufig variieren. Es ist möglich, dass restliche Farbverbindungen in diesen Lösungen Gewebe durch einen ionischen Mechanismus verfärben. Um diesen Fleck zu entfernen, ist es üblich, die Schnitte nach dem Färben mit saurem Alkohol zu behandeln. Jede nach der Behandlung mit saurem Alkohol verbleibende Farbe ist eine positive Reaktion des Pseudo-Schiff-Reagenzes. Keines dieser Pseudo-Schiff-Reagenzien erreichte auch nur annähernd die Popularität des Pararosanilin-Schiff-Reagenzes, und diese Lösung bleibt der Standard. Der Grund ist die leuchtende und klare rote Farbe des Pararosanilin-Schiff-Reagenzes. Andere Farbstoffe erzeugen eine schwache Farbe, obwohl nur wenige wirklich wirksam sind. Immer häufiger werden Lösungen mit einem Fluoreszenzfarbstoff, beispielsweise Acriflavin (siehe unten), hergestellt. Sie liefern ein fluoreszierend positives Ergebnis, das für den Nachweis von Materialien wie beispielsweise Pilzen, die in geringen Mengen vorhanden sein können, sehr nützlich sein kann. Culing stellt eine Liste vieler dieser Farbstoffe zur Verfügung, von denen einige hier aufgeführt sind. Weitere Informationen finden Sie in den unten aufgeführten Schriften von Kasten Culing. Name CI-Nr. Farbe Name CI-Nr. Farbe Saures Fuchsin violett Acriflavin Kristallviolett Blau Violett. Methylviolett lila. Methylenblau Safranin O Toluidinblau Wenn Gewebe aus dem Schiff-Reagenz entnommen und gewaschen werden, werden sie zwangsläufig in die Waschflüssigkeit überführt. Bei Verwendung von Leitungswasser verändert das Reagenz schnell seine Farbe und das Wasser wird stark rot. Anfänglich gab es einige Bedenken, dass sich dieses Schiff-Reagens zur erneuten Färbung wie ein Grundfarbstoff verhalten und Gewebe färben würde, was zu falsch positiven Ergebnissen führen würde. Aus diesem Grund wurden Sulfitspülungen empfohlen. Sie lösen schweflige Säure auf und werden verwendet, um das Schiffsche Reagenz einige Minuten lang abzuwaschen. Dabei lösen sie es gut genug auf, bevor die Stoffe in Wasser gewaschen werden. Dadurch wird sichergestellt, dass keine Gefahr von Nicht-Aldehyd-Flecken besteht. Die Erfahrung im Laufe der Jahre hat gezeigt, dass diese Spülungen nicht notwendig sind und ein gutes Waschen in Leitungswasser zufriedenstellend ist, solange die Schnitte nicht in Schiffs Reagenz belassen werden, das die Farbe wiederherstellt. Wenn Pseudo-Schiff-Reagenz verwendet wird, sollten die Schnitte nach dieser Wäsche 5–10 Minuten lang mit 1 %iger Salzsäure in 70 %igem Ethanol behandelt werden. Einige davon sind gefärbt, lassen sich nicht vollständig bleichen und können durch einen ionischen Mechanismus färben. Säurehaltiger Alkohol entfernt solche Flecken. Nach der Behandlung mit saurem Alkohol sollten die Schnitte wie gewohnt mit Leitungswasser gewaschen werden. Obwohl Schiffs Reagenz zum Nachweis von Aldehyden verwendet wird, kommen sie normalerweise nicht frei in Geweben vor und müssen auf irgendeine Weise hergestellt werden. Es gibt drei Möglichkeiten, dies zu tun. Die erste und bei weitem häufigste Ursache ist die Oxidation einiger Gewebebestandteile. Dadurch entstehen Aldehydgruppen, die es ermöglichen, das Material, an dem die Komponente befestigt ist, freizulegen. Die zweite Möglichkeit besteht darin, die Schnitte mit Säuren zu behandeln, um einen Teil der Desoxyribose in DNA und Aldehyde umzuwandeln, und sie dann mit Schiffs Reagenz anzufärben. Die dritte besteht darin, den Aldehyd direkt auf das Gewebe aufzutragen, normalerweise ein Protein, und dann den Aldehyd mit Schiffs Reagenz nachzuweisen. Letzteres lässt sich mit der Glutaraldehyd-Fixierung für die Lichtmikroskopie leicht erkennen. Glutaraldehyd hat zwei Aldehydgruppen und wenn Moleküle von einer von ihnen an das Gewebe angezogen werden, bleibt die andere ungebunden, wenn die Fixierung abgeschlossen ist. Aus diesem Grund reagieren bei jedem Verfahren, bei dem Schiffs Reagenz verwendet wird, einzelne Aldehyde damit und erzeugen einen tiefrosa Hintergrund. Bevor Schiffs Reagenz auf diese Abschnitte aufgetragen werden kann, müssen die Aldehyde blockiert werden, damit sie nicht reagieren können. Für jede Präzisionsanwendung mit diesem Reagenz müssen zwei Kontrollen verwendet werden. Das erste ist ein Schnitt, auf den eine Aldehydblockierung angewendet wurde. Der zweite ist ein Abschnitt, in dem Schiffs Reagenz ohne Vorbehandlung auf das Gewebe aufgetragen wurde. Der erste Schnitt blockiert somit alle bereits vorhandenen Aldehyde, während der zweite Schnitt hervorhebt, wo sie sich befanden. Darüber hinaus müssen natürlich Schnitte mit etablierten Negativ- und Positivkontrollen für das Zielgewebeelement verwendet werden. Wenn diese letzten beiden Kontrollen nicht wie erwartet färben, muss das Schiff'sche Reagenz und keine anderen untersucht werden, um sicherzustellen, dass es nicht beschädigt ist und für die Verwendung geeignet ist. Histochemie: Theoretisch und angewandt Ed. 3 Pearse, A. G. E., 1968, 1972, v.1, S. 448 Churchill Livingstone, Edingburgh, London, Großbritannien Histologische und histochemische Methoden: Theorie und Praxis Ed. 3 Kiernan. J. A., 1999, S. 203 Butterworth Heinemann Oxford, Großbritannien. Handbuch histopathologischer und histochemischer Techniken Ed. 3 Culling C. F. A., 1974, S. 249, 250 Butterworth London, Großbritannien. unter Berufung auf: Kasten, F.H., 1958 Stain Technology, Bd. 33, S. 39 und Kasten, F.H., 1959 Histochemie, Bd. 1, S. 466 Histopathologische Technik und praktische Histochemie Ed.2 Lillie, R. D., 1954 Blakiston New York, USA. http://stainsfile. info/StainsFile/stain/schiff/schiffwhatis. htm Periodische Säure-Schiff-Reaktion Periodsäure – Schiff Die PAS-Reaktion wird zum Nachweis des Vorhandenseins von 1,2-Glykolen verwendet und ist daher eine wichtige Technik in der Kohlenhydrathistochemie und dem histologischen Nachweis vieler Strukturen. Lösungen 1 % wässrige Periodsäure Reagens Schiffa Gemalaun Mayer Befestigung und Verkabelung Die meisten Befestigungs- und Verkabelungsmethoden sind zufriedenstellend. Glutaraldehyd-Fixierung erfordert Blockierung von Aldehyden vor dem Lackieren. Methode 1. Bringen Sie die Schnitte mit Xylol und Ethanol in Wasser. 2. 10–30 Minuten in Periodsäure legen. 3. Gut mit Leitungswasser abspülen. 4. In destilliertem Wasser abspülen. 5. 10–30 Minuten in Schiffs-Reagenz einlegen. 6. Mit destilliertem Wasser waschen. 7. Etwa 10 Minuten lang gut in Leitungswasser waschen. 8. Zum Abschluss 2 Minuten mit Mayer’s Hemalaun verfeinern. 9. Mit Leitungswasser gut waschen, bis Mayers Hämalaun blau wird. 10. Mit Ethanol dehydrieren, mit Xylol klären und in ein harziges Medium einbetten. Erwartete Ergebnisse Anmerkungen · Glutaraldehyd-Fixierungsmittel setzen freie Aldehydgruppen frei, indem sie sie an Gewebe anziehen. Sie verursachen eine völlig falsch positive Reaktion. Diese Reaktion muss durch ein geeignetes Verfahren, wie z. B. eine Anilin-Essigsäure-Blockierung, verhindert werden. · Für die Entwicklung der roten Farbe wird das Leitungswasser aus Schritt 7 benötigt. Längere Waschzeiten führen in gewissen Grenzen zu einer dunkleren Farbe. · Ursprünglich wurde empfohlen, das Schiffsche Reagenz durch Auflösen von schwefliger Säure zu waschen (Sulfitspülung). Während Wasser dem Schiff-Reagenz die Farbe zurückgab, wurde angenommen, dass das ausgewaschene Wasser zu falsch positiven Ergebnissen führen könnte. Mittlerweile ist bekannt, dass dies nicht der Fall ist, wenn das Schiff'sche Reagenz schnell entfernt wird und die Schnitte nicht lange im damit kontaminierten Wasser verbleiben. Die folgende, ebenfalls von Culling zusammengestellte Liste enthält häufig anzutreffende CHIC-positive Materialien, ist jedoch nicht erschöpfend: · Ansammlungen von Actinomyceten. · Kellermembranen. · Großhirn. Areoläres Bindegewebskollagen. · Zusammengesetzte Lipide. · Glykogen. · Kerazin (Gaucher-Krankheit). · Nierentubuli. · Megakaryozyten-Granulat. Mucine: § Darm-Trakt, § Pepsindrüsen, § Drüsen des Gebärmutterhalses, § Speicheldrüsen, § Bindehaut, § Bronchialdrüsen, § Eierstockfollikel und Zysten, § Sekretion der Prostatadrüsen, § Amyloidkörper, · Kapsel der Augenlinse. · Zymogenes Granulat der Bauchspeicheldrüse. · Paneth-Zellkörnchen (Ratten, Meerschweinchen, Kaninchen). · Phospholipide. · B-Zellen der Hypophyse. · Nierenhyaline Abdrücke. · Stäbchen der Netzhaut. · Roussel-Körperchen. · Stärke. · Schilddrüsenkolloid. unter Berufung auf: Hotchkiss, R. D., 1948 Arch. Biochem, Bd. 16, S. 131 http://stainsfile. info/StainsFile/stain/schiff/pas-standard. htm Letzte Aktualisierung August 2003.

Die Feulgen-Reaktion zeigt das Vorhandensein von DNA an und kann daher in erster Linie dazu verwendet werden, das Vorhandensein oder Fehlen von Zellkernen in Zellen, deren Größe, Form, Lage usw. festzustellen. Darüber hinaus kann die Intensität der Färbung indirekte Hinweise auf quantitative Veränderungen geben DNA.

Schiffs Reagenz – Fuchsinige Säure – ist ein charakteristisches Reagenz für Aldehyde. Die Feulgen-Reaktion mit diesem Reagens auf DNA basiert ebenfalls auf der Fähigkeit des Schiff-Reagens, mit Aldehydgruppen zu interagieren. Da die Aldehydgruppen im DNA-Molekül jedoch gebunden sind, müssen sie zunächst freigesetzt werden. Dies wird durch Hydrolyse der DNA mit einer schwachen Säure erreicht, wodurch Purinbasen (Adenin, Guanin) vom DNA-Molekül abgetrennt werden und der Rest des DNA-Moleküls mit freien Aldehydgruppen entsteht:

Die Veränderung erfolgt am ersten Kohlenstoffatom der Desoxyribose; An der Stelle der Purinbase-Abstraktion wird eine potenzielle Aldehydgruppe sichtbar. Bei. Dadurch wird die Furanoseform der Desoxyribose in die nichtzyklische Zuckerform umgewandelt. Während der Reaktion wird ein Molekül fuchsiniger Säure an die beiden Aldehydgruppen der Desoxyribose addiert.

Fuchsinige Säure (Leukofuchsin) wird aus einer sauren Lösung von basischem Fuchsin (Paraffuchsin) in 1 N gewonnen. Salzsäure, wenn sie mit Schwefeldioxid gesättigt ist. Schwefeldioxid entsteht durch die Wechselwirkung von Salzsäure mit Natriumbisulfit, die einer sauren Lösung von basischem Fuchsin zugesetzt werden:

HCl+NaHSO 3 =NaCl+SO 2 +H 2 O

Beim Einleiten von Schwefeldioxid in eine Fuchsinlösung werden zwei Doppelbindungen aufgebrochen, die Chinoidgruppe verschwindet in einem der drei aromatischen Ringe des Fuchsins und damit auch die für Fuchsin charakteristische lilarote Farbe. Fuchsinige Säure ist eine zerbrechliche, farblose Verbindung.

Die Herstellung von fuchsiniger Säure aus basischem Fuchsin verläuft wie folgt: Fuchsin bildet in Wechselwirkung mit Salzsäure eine Komplexverbindung, die dann mit schwefliger Säure nach folgendem Schema reagiert:

Bei der Bildung von Fuchsinsäure werden dem Fuchsin also zwei Gruppen (-SO 2 H) hinzugefügt.

Bei der Reaktion mit Aldehyden wird die Chinoidgruppe wiederhergestellt, da fuchsinige Säure eine instabile Verbindung ist und sich zu schwefliger Säure zersetzt.

Wenn ein Molekül fuchsiniger Säure mit zwei Molekülen DNA-Resten mit freiliegenden Aldehydgruppen reagiert, wird ein Molekül einer farbigen Verbindung erhalten.

Bei der Vorbereitung von Material für die Feulgen-Reaktion wird normalerweise die Fixierung in Alkohol und sauren Fixiermitteln empfohlen. Am häufigsten wird Carnoys Fixiermittel verwendet (S. 45). Ein solches Fixiermittel fällt Nukleoproteine ​​aus, was zu gelungenen morphologischen Bildern führt. Ein längerer Aufenthalt des Materials im Fixiermittel führt jedoch zur Zerstörung der Bindung zwischen Nukleinsäuren und Proteinen, führt zu einer allmählichen Extraktion von Nukleinsäuren und ergibt ein verzerrtes Bild. Daher sollte der Aufenthalt im Fixateur so gering wie möglich gehalten werden.

Reagenzien

1) Schiffs Reagenz (fuchsinige Säure).

Herstellung des Schiffschen Reagenzes. 1 g basisches Fuchsin im Mörser zermahlen und in 200 ml kochendem destilliertem Wasser auflösen; auf 50°C abkühlen lassen. 20 ml 1 N zur abgekühlten Lösung hinzufügen. Salzsäure* hinzufügen und auf 25°C abkühlen lassen. 1 g Natriumbisulfit oder Metabisulfit hinzufügen. Schütteln Sie die resultierende Mischung mit Aktivkohle (1 bis 3 Minuten) und filtrieren Sie. In ein dunkles Gefäß füllen oder in dunkles Papier einwickeln, mit einem Schliffstopfen verschließen und mindestens 12 Stunden im Dunkeln stehen lassen, bis sich das Hauptfuchsin verfärbt und sich fuchschwefelige Säure bildet.

* (1 n. Salzsäure entspricht einer 10 %igen Lösung aus konzentrierter Salzsäure (S. 1.19))

2) Schwefelhaltiges Wasser.

Aufbereitung von Schwefelwasser. Zu 200 ml destilliertem Wasser 20 ml 1 N hinzufügen. Salzsäure und 1 g Natriumbisulfit.

3) 1 n. Salzsäure.

4) Medien zum Entwässern von Gegenständen und zum Einhüllen derselben in Kanadabalsam (S. 66-70).

5) Kanadabalsam.

Durchführung der Reaktion

* (Siehe Fußnote auf Seite 118.)

1. Tauchen Sie die Präparate in 1 N. Salzsäure für ein paar Sekunden.

2. Übertragen Sie sie in einen auf 60° C vorgeheizten Kühlschrank. HCl hinzufügen und für 5-10 Minuten in einen Thermostaten mit einer Temperatur von 60° C (oder in ein Wasserbad mit der gleichen Temperatur) stellen *.

* (Die Dauer der Hydrolyse hängt vom verwendeten Fixiermittel ab. Bei Verwendung von Carnoys Fixiermittel und Formalin beträgt die optimale Zeit 8 Minuten.)

3. Spülen Sie die Präparate mit kaltem 1 N ab. HCl.

4. Legen Sie sie 1 Stunde lang in Schiffs Reagenz.

5. Überschüssiges Schiff's Reagenz mit schwefelhaltigem Wasser abwaschen (3 Schichten à 3–5 Minuten).

6. Spülen Sie die Zubereitungen 5–10 Minuten lang in Leitungswasser ab und ersetzen Sie dabei das Wasser, das sich rosa zu färben beginnt.

7. Bringen Sie die Präparate durch 96 %, 100 % Alkohol, eine Mischung aus Alkohol mit Xylol und Xylol, zum Balsam.

8. Beobachten Sie das Erscheinen einer purpurroten Farbe.

Reaktionsergebnisse (Tabelle 20)

An der Spitze der Zwiebelwurzel nehmen die Kerne eine purpurviolette Farbe an. Die Kerne der Ausdehnungszone und insbesondere der Saugzone erscheinen etwas weniger hell als die Kerne der Spaltungszone. Die Nukleolen, das Zytoplasma und die Zellmembranen bleiben ungefärbt.

Im Maiskörner sind die Kerne der Wurzel, der Knospe und aller anderen Gewebe des Embryos sowie die Zellen der Aleuronschicht in einer für die Feulgen-Reaktion charakteristischen Farbe bemalt. Die abgeflachten und gestreckten Kerne der Endospermzellen sind blasser gefärbt.

(N. Schiff, 1834-1915, deutscher Biochemiker)
ein Reagenz zur qualitativen Bestimmung der Aldehydgruppe organischer Substanzen, bei dem es sich um eine Lösung von Fuchsinsäure handelt; Wird zum histochemischen Nachweis von Kohlenhydraten und Desoxyribonukleinsäure verwendet.

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(N. Schiff, 1834-1915, deutscher Biochemiker)

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