温度別最適成長

アナトキシン

チケット番号 26

1. 細菌培養の基本原理。栄養培地で微生物を培養する基本原理。 1. 対応する微生物に必要なすべての栄養成分の使用 2. 最適な温度、pH、rH 2、イオン濃度、酸素飽和度、ガス組成および圧力を提供するサーモスタット内の栄養培地で培養されます。インキュベーション条件。温度別最適成長微生物には 3 つの主要なグループがあります。 1. 好冷菌 - 摂氏 +20 度未満の温度で増殖します。 2. 中温菌 - 20 度から 45 度の温度範囲で増殖します (多くの場合、37 度で増殖します)。プラス45度以上の気温。栄養培地の簡単な特徴。粘稠度に基づいて、液体培地、高密度培地 (1.5 ～ 3% 寒天)、および半液体培地 (0.3 ～ 0.7% 寒天) が区別されます。寒天は海藻から得られる複雑な組成の多糖類であり、高密度（固体）培地の主な硬化剤です。炭素と窒素の普遍的な供給源として、ペプトンは、ペプシンによるタンパク質発酵生成物、さまざまな加水分解産物、肉、魚、カゼイン、酵母などに使用されます。培地の目的に応じて、ペプトンはいくつかのグループに分類されます。

汎用（シンプル）、さまざまな要求の厳しい微生物に適しています（肉ペプトンブロス - MPB、肉ペプトン寒天 - MPA）。 - 汎用培地では増殖しない微生物用の特殊培地（野兎病用のマッコイ培地、野兎病用のレーベンシュタイン・ジェンセン培地）。結核の原因物質）; - 鑑別診断 - 酵素活性と文化財によって微生物を区別するため（Endo、Ploskirev、Levin、Gissa media）。

選択的（選択的） - 特定の種類の微生物を分離し、関連する微生物の増殖を抑制するための - ペプトン水、亜セレン酸培地、ミュラー培地は、培地の起源に基づいて、天然、半合成、合成に分類されます。

チケット番号 27

アナトキシン

化学的に修飾された外毒素を含む製剤で、毒性はありませんが、高い抗原性と免疫原性を保持しています。これらの薬物は、抗毒性免疫（抗毒性抗体 - 抗毒素）の生成を提供します。最も広く使用されているのは、ジフテリアトキソイドと破傷風トキソイドです。 DTP - 百日咳・ジフテリア・破傷風関連ワクチン。

3 . 麻疹ウイルス- パラミクソウイルス科のモルビリウイルス属の代表。ノイラミニダーゼが欠如しています。血球凝集作用、溶血作用、およびシンプラスチック作用があります。ウイルスは、抗原特異性と免疫原性が異なる血球凝集素、溶血素（F）、核タンパク質（NP）、およびマトリックスタンパク質を持っています。臨床検査診断.1. 高速診断法 - 影響を受けた細胞内の蛍光抗体を使用したウイルス抗原の検出。 2. ウイルス学的診断 - 発疹が出現する前に血液が検査され、鼻咽頭からの粘液が培養細胞の感染について検査されます。細胞変性効果が決定され、RTGA、RN、MFA でウイルスが特定されます。3. 血清学的方法 - RSK、RTGA、ELISA。特定の予防. 弱毒化生ワクチンが使用されます。接触者の場合、抗麻疹免疫グロブリンまたは正常ドナー免疫グロブリン 3.65 ポリオウイルスを使用して血清予防を行うことができます。 . ポリオウイルスは、ニューロンに損傷を与える急性感染症であるポリオウイルスを引き起こします。ポリオウイルスの最も重要な生物学的特性は、脊髄灰白質の運動細胞に対する指向性です。ビリオンキャプシドは、キャプシドの外側表面 (VP1、VP2、VP3) と内側表面 (VP4) を形成する 4 つのタンパク質によって形成されます。。エンベロープタンパク質は、細胞受容体の認識と結合、細胞内でのビリオン RNA の放出、および麻痺の発症に重要であり、その抗原特性に基づいて、ポリオウイルスは 3 つのタイプに分類されます。活動。臨床検査診断 1. ウイルス学的診断には、さまざまな細胞培養物または新生白マウスでのウイルスの分離と、その後の参照血清を用いた RN、RTGA、RSC における細胞変性効果による同定が含まれます。血清学的診断はさまざまな反応 (現在は ELISA) で行われます。ペアになった血清を研究し、特異的な IgM 抗体を同定する必要があります。免疫と具体的な予防ポリオウイルスに対する免疫はウイルス中和抗体と免疫記憶細胞によって持続します。特定の予防には、不活化ワクチンと弱毒化生ワクチンが使用されます。

チケット番号 28

1. ウイルスの基本的な培養方法.

1. 実験動物の体内 2. ニワトリの胚 3. 細胞培養 - 主な方法。細胞培養の種類 . 1. 初代（トリプシン処理）培養物 - ニワトリ胚線維芽細胞（CHF）、ヒト線維芽細胞（CHF）、さまざまな動物の腎臓細胞など。初代培養物は、さまざまな組織の細胞から破砕およびトリプシン処理によって得られることが最も多く、一度だけ使用されます。適切な器官または組織が常に必要です。 2. 二倍体細胞株は、原則として 20 継代以下の繰り返し増殖に適しています (元の特性が失われます)。 3. 移植可能な株 (異数体培養)。繰り返しの分散と移植が可能です。複数の継代まで可能で、ウイルス学的研究に最も便利です - たとえば、腫瘍細胞株 Hela、Hep など。 2. 遅延型過敏症（DTH）- 感作リンパ球の存在に関連する細胞性過敏症または 4 型過敏症。エフェクター細胞は、 DTH T細胞 HRT における T 細胞の感作は、接触アレルギー物質 (ハプテン)、細菌、ウイルス、真菌、原生動物の抗原によって引き起こされる可能性があります。体内の同様のメカニズムにより、抗腫瘍免疫では腫瘍抗原が発生し、移植免疫ではドナーの遺伝的に外来の抗原がDTHのT細胞によって外来抗原を認識され、ガンマインターフェロンおよびさまざまなリンホカインが分泌され、マクロファージの細胞毒性が刺激され、TおよびB免疫が強化されます。歴史的に、HRT は皮膚アレルギー検査 (ツベルクリン - ツベルクリン検査) で検出され、抗原の皮内注射から 24 ～ 48 時間後に検出されました。この抗原によって以前に感作された微生物のみが、投与された抗原に対する HRT の発症に反応します。感染性 HRT の典型的な例は、感染性肉芽腫の形成です (ブルセラ症、結核、腸チフスなどにおける)。組織学的には、HRT は最初に好中球が、次にリンパ球とマクロファージが病変に浸潤することを特徴としています。 DTH の感作 T 細胞は、樹状細胞の膜上に存在する相同エピトープを認識し、マクロファージを活性化してその部位に他の炎症細胞を誘引するメディエーターも分泌します。 HRT に関与する活性化されたマクロファージおよびその他の細胞は、炎症を引き起こし、細菌、腫瘍、その他の外来細胞を破壊する多くの生物学的に活性な物質を分泌します - サイトカイン (IL-1、IL-6、腫瘍壊死因子α)、活性酸素代謝産物、プロテアーゼ、リゾチームとラクトフェリン。 3. ブドウ球菌 . この属には 20 種以上の種が含まれており、そのうち最も重要なものは黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、グラム陽性球菌であり、ブドウの房の形でクラスター内に相互に配置されるのが特徴です。それらはマイクロカプセルを持ち、胞子を形成せず、通性嫌気性菌や化学有機栄養生物を持ちません。それらは、単純な栄養培地でよく成長し、高密度培地では、リポクローム色素（クリーム、黄色、オレンジ）の色で着色された不透明な円形（直径2〜4 mm）のコロニーを形成します。 S 型に加えて、コロニーは R 型を形成する場合があります。液体培地中では均一な濁りが生じ、その後緩い沈殿が形成されます。これらは高い生化学的活性を持ち、さまざまな酵素を形成します。カタラーゼは陽性、オキシダーゼは陰性です。炭水化物はガスを発生させずに酸に発酵し、ゼラチンを液化して漏斗を形成し、硫化水素を生成します。コアグラーゼの存在に基づいて、それらはコアグラーゼ陽性とコアグラーゼ陰性の 2 つのグループに分けられます。病原性種のうち、黄色ブドウ球菌のみがコアグラーゼ陽性であり、残りの種特異的抗原は黄色ブドウ球菌のプロテイン A であるテイコ酸です。毒素には抗原性があります。病原性因子マイクロカプセル、細胞壁成分（テイコ酸、プロテインA）、酵素、毒素。接着因子は、表面構造の高い疎水性です。細胞壁成分は炎症反応の進行を刺激し、好中球が主要な役割を果たします。ブドウ球菌のさまざまな酵素が、攻撃因子と防御因子の役割を果たしています。主な要因は血清（血漿）を凝固させ、ブドウ球菌を包み込み、体の防御反応の作用を妨げるトロンビン様物質を形成するプラズマコアグラーゼです。外毒素: 膜損傷毒素は、赤血球 (溶血素)、白血球、マクロファージ、血小板などに損傷を与える可能性があります。抗原構造、溶解細胞のスペクトル、および作用速度が異なるいくつかの種類があります。剥離性毒素には皮膚壊死作用があります (新生児の天疱瘡）、毒素症候群ショックを引き起こす外毒素。吸収性の高いタンポンは、食中毒に関連した重篤なエンドトキシンショックを女性に引き起こしました。エンテロトキシンは、スーパー抗原特性を持つ熱安定性タンパク質です。これらはインターロイキン 2 の過剰な合成を引き起こし、中毒を引き起こします。中毒は、ほとんどの場合、ブドウ球菌に感染した乳製品の摂取に関連しています。5. ブドウ球菌の多くの外毒素およびその他の構造にはアレルギー誘発作用があり、HRT の発症に影響を与えます。交差反応する抗原の存在は、自己免疫プロセスの発達に寄与します。6. 食作用を阻害する因子 - カプセル、プロテイン A、テイコ酸、ペプチドグリカン、毒素。病原体の特別な性質。 1. ほぼすべての組織および器官に影響を与える能力。2. 非芽胞形成細菌の環境要因に対する非常に高い耐性。３．皮膚や粘膜に常に存在し、外部環境と連絡をとっています。超抗原性 5. 高い変動性と抗生物質耐性。これは流行のプロセスにとって重要です。感染後の免疫ブドウ球菌感染症は、細胞性感染症と体液性感染症、抗菌性感染症と抗毒性感染症に分類でき、抗毒素、抗菌抗体、病原性酵素に対する抗体、Tリンパ球、食細胞（局在型の組織マクロファージ）が防御に重要な役割を果たします。検査室診断。細菌学的、顕微鏡的、血清学的方法が使用されます。主な方法は細菌学的方法で、血液、膿、鼻や咽頭からの粘液、傷口の分泌物、痰（肺炎の場合）、糞便（大腸炎の場合）、疑わしい物質、嘔吐物、胃洗浄液、糞便などです。食中毒細菌検査が行われ、ブドウの房の形をしたグラム陽性球菌（ブドウ球菌）が特定されます。材料は単純な栄養培地に播種されます。疑わしいコロニーを選択し、異なる培地（血液寒天培地（溶血）、牛乳塩寒天、牛乳卵黄塩寒天培地）での研究のために継代培養します（NaCl により外来微生物叢の増殖が阻害され、培地の使用により、より良好な微生物叢の増殖が可能になります）色素とレシチナーゼを特定します)。分離された培養物は種の特徴によって識別され、黄金色素の存在、プラズマコアグラーゼ活性、マンニトール発酵、溶血、抗生物質に対する感受性が判定され、ファージタイピングが実行されます。血清学的検査のうち、RPHA と ELISA は抗体の検出に最もよく使用されます。エンテロトキシン原性を測定するには、寒天沈殿反応におけるエンテロトキシンの測定、RNase (エンテロトキシンの生成と相関する) の測定など、生物学的方法が使用されることがよくあります。予防と治療適切な抗菌療法を実施するには、抗生物質（主にベータラクタム）に対する培養物の感受性を判断する必要があります。重篤で長期にわたる場合には、ドナー抗ブドウ球菌免疫グロブリンが使用されます。免疫を生成するには、抗毒性免疫を生成するブドウ球菌トキソイドが使用されます。

チケット番号 29

1. 抗生物質微生物の拮抗作用の普遍的なメカニズムの 1 つは、微生物の増殖と繁殖を阻害したり (静菌効果)、死滅させたり (殺菌効果) する抗生物質の合成です。抗生物質は、微生物、植物、動物組織から合成的に得られる物質であり、微生物に対して顕著な生物学的活性を持っています。抗生物質には、低濃度での有効性、体内およびさまざまな保存条件下での安定性など、多くの要件があります。 - 毒性が低い、またはその欠如; - 顕著な静菌作用および（または）殺菌作用がない; - 顕著な副作用がない; - 最初に発見された抗生物質はペニシリン（Fleming）とストレプトマイシン（Waxman）でした。

抗生物質は、起源、作用の方向とスペクトル、作用機序によって分類できます。抗生物質の起源は次のとおりです。 - 細菌由来（ポリミキシン、グラミシジン） - 放線菌（ストレプトマイシン、クロラムフェニコール、エリスロマイシン） - 植物由来（ラファニン、フィトンチッド）;抗生物質は、主にグラム陽性菌叢に作用する - ペニシリン、エリスロマイシン、 - 主にグラム陰性菌叢に作用する - ポリミキシン、 - 広域スペクトル（グラムプラスおよびグラムマイナス菌叢に） - ストレプトマイシン、 - 抗真菌薬 - ナイスタチン、アンホテリシン、レバリン、ニゾラール; - 抗結核薬 - ストレプトマイシン、カナマイシン; - 抗ウイルス薬 - インターフェロン、ゾビラックス、アシクロビル。合成（ペニシリン、セファロスポリン、バンコマイシン、リストマイシン）。細胞壁を有する増殖中の細菌に作用し、L 型細菌、休止状態の細菌には作用しません。 - タンパク質合成阻害剤（ストレプトマイシン、クロラムフェニコール、テトラサイクリン） - 核酸、プリン、アミノ酸の合成阻害剤（ナリジクス酸）。、リファンピシン）; - 真菌の膜および細胞質膜の合成阻害剤（ナイスタチン、ポリミキシン）。

3. 肺炎球菌。連鎖球菌属の特別な位置をこの種が占めています。肺炎球菌（肺炎球菌）- 大葉性肺炎、急性および慢性の炎症性肺疾患の病原体。他の連鎖球菌とは、形態（通常、双球菌はろうそくの炎の形をしており、平らな端が向かい合っていて、顕著な莢膜を持っています）、抗原特異性（莢膜多糖抗原について 83 の血清型を持っています）、胆汁に対する高い感受性が異なります。とオプトチンが結合し、アルファ溶血を引き起こします。病原性の主な要因は多糖類のカプセルです。検査室診断。主な診断方法は細菌学的です。研究の材料 - 血液、膿、喉の粘液、扁桃腺のプラーク、傷口の分泌物。分離された作物の研究における決定的な要素は、血清群 (種) の決定です。グループ特異的抗原は、沈殿反応、ラテックス凝集、凝集、ELISA、およびモノクローナル抗体 (MAb) を使用した MFA で測定されます。血清学的方法は、連鎖球菌病因によるリウマチおよび糸球体腎炎の診断によく使用されます。ストレプトリシン O およびストレプトドルナーゼに対する抗体が決定されます。

2. 免疫グロブリン、構造および機能。

3. ARVI の病原体。分類学。特性。検査室診断。具体的な予防と治療。

2. 抗原: 定義、基本特性。細菌細胞の抗原。

3. 緑膿菌。分類学。特性。微生物学的診断と治療。

1. 細菌の着色特性。塗装方法

1.顕微鏡法（発光法、暗視野法、位相差法、電子法）。

2. 受動的赤血球凝集反応。コンポーネント。応用。

1.細菌の増殖と繁殖。生殖段階:

1.細菌がエネルギーを得る方法（呼吸、発酵）：

1.細菌培養の基本原理:

2. 土壌の衛生および微生物学的研究。微生物数、大腸菌力価、土壌ウェルシュ菌力価。

1.人工栄養培地とその分類。栄養培地の要件。

3.クラミジアの原因物質。分類学。特性。微生物診断。処理。

1. 腸内細菌叢の異常。細菌異常症。正常な微生物叢を回復するための準備：プロバイオティクス、ユーバイオティクス。

1. 微生物に対する物理的および化学的要因の影響。滅菌、消毒、無菌、防腐剤の概念。物理的要因の影響。

2. ウイルス感染症の診断に使用される血清学的検査。

1. 感染の概念。感染プロセスの発生条件。

3. 破傷風の原因物質。分類と特徴。微生物学的診断と治療。

3. 発疹チフスの原因物質。分類学。特性。ブリル・ジンサー病。微生物診断。具体的な予防と治療。

3. ダニ媒介発疹チフスの原因物質。

1.細菌毒素の特徴。

3. 天然痘の原因物質。分類学。特性。検査室診断。天然痘の特異的予防。

3. 真菌症（真菌）の分類。特性。人間の病理における役割。検査室診断。処理。

1. 空気中の微生物叢とその研究方法。空気中の衛生指標微生物。

1.細菌培養の基本原理:

嫌気性菌の培養方法。

嫌気性菌を培養するには、培地の酸化還元電位を低下させ、嫌気状態、つまり培地とその周囲の酸素含有量が低い状態を作り出す必要があります。これは、物理的、化学的、生物学的方法を使用して達成されます。

物理的な方法。これらは、空気のない環境での微生物の培養に基づいており、1) 還元性物質と酸化されやすい物質を含む培地に播種することによって、2) 微生物を高密度の栄養培地に播種することによって、3) 容器から空気を機械的に除去することによって達成されます。嫌気性微生物が増殖する場合、4) 容器内の空気を無関心なガスで置換する。

化学的方法。これらは、ピロガロールやハイドロ亜硫酸ナトリウム Na2S2O4 などの物質を含む密閉容器 (アネロスタット、デシケーター) 内での空気酸素の吸収に基づいています。

生物学的方法。厳密な好気性菌と嫌気性菌の共同培養を基本としています。これを行うには、滅菌メスを使用して、凍結した寒天プレートからカップの直径に沿って幅約 1 cm の寒天片を切り取ります。1 つのカップに 2 つの寒天半円盤が入ります。寒天プレートの片面に好気性菌を接種します。たとえば、黄色ブドウ球菌やセラチア・マルセッセンスがよく使用されます。反対側には嫌気性菌を蒔きます。カップの端を粘土で密閉するか、溶融パラフィンで満たし、サーモスタットに置きます。条件が整えば、カップ内で好気性菌が増殖し始めます。カップの空間内の酸素がすべてそれらによって使用されると、嫌気性菌の増殖が始まります（3〜4日以内）。カップ内の空気層を減らすために、栄養培地をできるだけ厚い層に注ぎます。

2. 免疫担当細胞。 T および B リンパ球、マクロファージ. Tリンパ球これらは次の機能を実行します: 細胞性免疫の主なエフェクターです; 炎症、免疫反応および造血の調節因子です; さまざまな組織の修復および生理学的再生のプロセスに関与します。 - CD4+ 細胞と CD8+ 細胞。機能的特徴に従って、T リンパ球集団は、体液性免疫の T ヘルパー、細胞性免疫の T ヘルパー、T サプレッサー、および細胞傷害性 T 細胞に分類されます。 B リンパ球は主にエフェクター免疫担当細胞であり、リンパ球の総数の約 15% を占めます。 B リンパ球には 2 つの亜集団があります。CD5 マーカーを持たない「通常の」B 細胞と CD5 + B1 リンパ球です。成熟した B リンパ球とその子孫である形質細胞 (形質細胞) は、抗体産生細胞です。同社の主な製品は免疫グロブリンです。さらに、B リンパ球はプロフェッショナル APC (抗原提示細胞) です。それらは、体液性免疫、B 細胞免疫記憶、即時型過敏症の形成に関与します。 B リンパ球の子孫は免疫記憶細胞と形質細胞です。後者の主な形態学的特徴は、広範な細胞質、発達した小胞体、および多数のリボソームを備えたゴルジ体である。活発に合成されている形質細胞の寿命は長くなく、せいぜい 2 ～ 3 日です。

機能的活動 Bリンパ球 T細胞抗原受容体（TCR）の構造と機能的方向に応じて、T2ヘルパー、マクロファージ、およびその他の細胞の可溶性抗原および免疫サイトカイン（IL-4、5、6など）によって制御されます。それらは、アルファ-ベータとガンマ-デルタの2つのタイプのTCRに区別されます。 1 つ目のタイプはヘテロ二量体で、2 つのポリペプチド鎖 - アルファとベータで構成されます。これは、ヘルパー T 細胞およびキラー T 細胞として知られる従来の T リンパ球の特徴です。 2 番目のタイプは、ガンマデルタ T リンパ球の特別な集団の表面に見られます。専門的には、T リンパ球は免疫調節因子とエフェクターという 2 つの部分集団にも分類されます。免疫応答を調節する（主に活性化する）タスクは、ヘルパー T によって実行されます。 T サプレッサーの存在は、免疫応答の発生を阻害する (抑制) 機能に起因すると考えられていました。 О エフェクター機能は、細胞傷害性リンパ球、つまり T キラー細胞とナチュラルキラー細胞によって実行されます。 体内のTリンパ球免疫反応の細胞形態（遅延型過敏症、移植免疫、抗腫瘍免疫など）を提供し、免疫反応の強さと持続時間を決定します。それらの成熟、分化、および活性はサイトカインによって制御されます。キラー T 細胞は、自分自身の体の細胞を分析して、変化した細胞を探します。クラスI抗原-MHC複合体のそれ自体の構造とは異なります。突然変異細胞、ウイルスに感染した細胞、または同種異系移植の細胞は、その表面に遺伝的異物のこのような兆候を保持しています。したがって、それらは T キラーの標的です。T キラーは、抗体非依存性の細胞媒介細胞毒性を通じて標的細胞を排除し、そのためにパーフォリン、グランザイム、グラニュライシンなどの多くの有毒物質を合成します。 パーフォリン- 細胞傷害性リンパ球によって合成される毒性タンパク質 - T キラーおよびナチュラルキラーは、体内で抗体非依存性の細胞媒介細胞毒性、T 細胞免疫記憶の形成、および遅延型過敏症を引き起こします。さらに、活性化されたキラー T 細胞は、免疫炎症を刺激するガンマ IFN と TNF (腫瘍壊死因子) を合成します。

1.細菌の栄養の種類と仕組み.

炭素の吸収に基づいて、細菌は 2 つのタイプに分類できます。

1. 独立栄養菌（無機化合物や二酸化炭素からも炭素を得ることができます。独立栄養菌は、鉱物化合物の酸化から有機物質の合成に必要なエネルギーを取得します。独立栄養菌には、硝化細菌（土壌中に存在する）、硫黄細菌（硫化水素を含む温かい温泉に生息する）、鉄バクテリア（第一鉄を含む水中で繁殖する）など）

窒素を同化する能力に基づいて、細菌も 2 つのグループに分類されます。

1. アミノ独立栄養生物（空気中の分子状窒素、窒素固定土壌、根粒細菌を使用）

2. アミノ従属栄養生物。 (有機化合物 - 複雑なタンパク質から窒素を取得します。すべての病原性微生物とほとんどの腐生植物はアミノ従属栄養生物です)

エネルギー源に応じて区別されます

1. 光合成細菌 - 太陽光がエネルギー源となる細菌、

2. 化学栄養生物 - 物質の化学酸化を通じてエネルギーを得る細菌。

細菌の栄養の仕組み

1. 最も単純な方法は受動拡散であり、濃度勾配（細胞膜の両側の濃度差）の違いにより細胞内への物質の侵入が起こります。

2. これらのメカニズムの 1 つは促進拡散です。これは、物質の濃度が細胞内よりも細胞外の方が高い場合に発生します。促進拡散は特殊なプロセスであり、パーミアズと呼ばれる特別な膜タンパク質、キャリアによって実行されます。これは、それらが酵素の機能を実行し、特異性を備えているためです。それらは物質の分子に結合し、それを変化させずに細胞膜の内面に輸送し、細胞質に放出します。物質の移動は高濃度から低濃度へ起こるため、このプロセスはエネルギーを消費せずに起こります。

3. 物質の輸送に考えられる 3 番目のメカニズムは、能動輸送と呼ばれます。この圧力は環境内の基質の濃度が低い場合に観察され、溶質の輸送も変化せずに濃度勾配に逆らって発生します。透過酵素は物質の活発な移動に関与します。細胞内の物質の濃度は外部環境よりも数千倍高くなる可能性があるため、活発な移動には必然的にエネルギーの消費が伴います。酸化還元プロセス中に細菌細胞によって蓄積されたアデノシン三リン酸 (ATP) が消費されます。

4. 栄養素移動の 4 番目の可能なメカニズムでは、ラジカルの移動が観察されます。これは、全体として膜を通過できない化学的に変化した分子の活発な移動です。パーミアーゼはラジカルの輸送に関与します。

2. 補体結合反応。機構。コンポーネント。アプリケーション.P SC は、性感染症、リケッチア症、ウイルス感染症の検査室診断に広く使用されています。反応は 2 段階で起こります。第 1 段階は、補体の必須の関与を伴う抗原と抗体の相互作用です。 2 つ目は、指示薬溶血システム (羊の赤血球と溶血血清) を使用して反応の結果を特定することです。溶血血清による赤血球の破壊は、溶血系に補体が添加された場合にのみ起こります。補体が抗原抗体複合体に事前に吸着されている場合、赤血球の溶血は起こりません。

検査血清中に抗原に相補的な抗体が存在する場合、結果として生じる抗原抗体複合体が補体と結合（吸着）します。溶血システムを追加すると、溶血が起こらなくなります（溶血遅延）。すべての補体は抗原抗体複合体の特異的結合に費やされ、赤血球は変化しないまま、血清中に抗原に相補的な抗体が存在しない場合、特異的な抗原抗体複合体は形成されず、補体が残ります。縛られていない。したがって、溶血系が追加されると、補体がそれに付着します。この場合の反応の結果は赤血球の溶血になります。RSK を使用すると、同じ血清型のウイルスに対する抗体を検出できます。いわゆる「ワニス」血液が試験管内で形成されます。特徴的な臨床像を有する患者のペア血清における抗体力価の 4 倍の増加（インフルエンザの流行中）と血清の 2 倍の増加は、診断上重要です。

3. ブドウ球菌。分類学。特性。ブドウ球菌によって引き起こされる病気の微生物学的診断。具体的な予防と治療。 1) ミクロコッカス科 2) ミラコッカス属、ブドウ球菌属 (病原性種を持つ)、プラノコッカス属 (移動性、非病原性で海水に生息) 3) ブドウ球菌属 19 の種、主なもの、人体と生態学的に関連 - 3:黄色ブドウ球菌（黄色ブドウ球菌 - 病原性）、表皮ブドウ球菌（皮膚または表皮 - 条件付き病原性）、S. saprophyticus（腐生菌 - 病気を引き起こす可能性がある）。 形態学- 形状は球形で、鞭毛や胞子を持たず、マイクロカプセルを形成することができ、多形性があり、抗生物質（ペニシリン）の影響下で L 型を形成します。 着色特性– グラム+;

文化財- 酵素活性が高いため、培地に要求がありません。それらは炭水化物、グルコースを分解し、酸とガスに招きます。嫌気的条件下では脂質とタンパク質を分解し、カタラーゼを放出します。 DDS (鑑別診断培地) - ブドウ球菌卵黄塩寒天 (YSA) 用。基本はMPAです。基質 - 卵黄レシチン、10-15% NaCl - 他の微生物の増殖を阻害する選択因子。黄色ブドウ球菌はコロニーの周囲にレシチン分解ゾーンを形成し、雲のように見えます。さらに、黄色ブドウ球菌は黄色の細胞内色素を生成します。ブドウ球菌のコロニーは「S」字型、つまり丸くて滑らかです。滑らかなエッジ、光沢があり、レモン色素または白いコロニーを伴う金色になる場合があります。 酵素の性質ブドウ球菌は重要な生化学的活性を持っています。ブドウ糖、スクロース、マルトース、ラクトース、マンニトールを分解して酸を形成します。嫌気的条件下でのマンニトールの発酵は、黄色ブドウ球菌種を特徴づけます。ブドウ球菌のタンパク質分解活性は、タンパク質の分解中に硫化水素を放出し、注射に沿って漏斗の形で4〜5日以内にゼラチンを液化する能力として現れます。 AG - プロパティ- ブドウ球菌には 50 以上の抗原物質があり、ジェネリック、種、Ag 型に分けられます。。 種特異的銀ブドウ球菌はテイコ酸として機能します。黄色ブドウ球菌の場合、プロテイン A は種特異的な抗原でもあります。 病原性– ブドウ球菌は、さまざまな局在性、本質的に局所的および全身性の化膿性炎症プロセスを引き起こします-敗血症、敗血症性赤血症。ブドウ球菌によって引き起こされる病気：膿皮症、おでき、癰、リンパ節炎、気管支炎、肺炎、中耳炎、扁桃炎、髄膜炎、心筋炎、胆嚢炎、骨髄炎など。院内感染や院内感染は特に危険です。 ブドウ球菌の病原性因子。 3 つのグループ (毒素、病原性酵素、表面構造) があります。

1) 毒素黄色ブドウ球菌の膜毒素（スタフィロリシンまたは溶血素）。

エンテロトキシン A、B、C1-3、D、E は熱安定性の低分子タンパク質です。食中毒の発症の原因となるのはこれらの毒素です。最も頻繁に記録されている中毒は、エンテロトキシン A および D によって引き起こされる中毒です。これらはスーパー抗原特性を示します。 2) 酵素病原性 - これらは外酵素です: プラズマコアグラーゼ -; フィブリノリシン - レシチナーゼ - DNase; ヒアルロニダーゼ - 分布因子; その他の酵素 - リパーゼ、ホスファターゼ、プロテイナーゼ。3) 表面構造- プロテインまたはプロテイン A は食作用を妨げ、オプソニン化を減少させ、Ig の fc フラグメントに結合し、カプセルとして機能します。 物理的および化学的要因に対する敏感さ– ブドウ球菌は乾燥に非常に耐性があり、非常に長期間（最長数か月）膿の中で存続する可能性があります。。日光に10～12時間直接さらされると枯れますが、熱には非常に強く、70～80℃では20～30分、150℃では10分で枯れます。乾熱では細菌は 2 時間で死滅しますが、消毒剤には耐性がありませんが、純粋なエタノールには耐性があります。 感染源ブドウ球菌感染の主な感染源は、ブドウ球菌による喉の痛みのある人、粘膜上のブドウ球菌の保菌者、ブドウ球菌に汚染された物品です。 感染の伝播経路: 1) 外因性 - ほとんどの場合空気感染し、食事性および非経口性の可能性があります; 2) 内因性 - 低体温、過熱、ストレス、ウイルス感染などの影響による自分自身の微生物叢の活性化。 病因。ブドウ球菌は、すべての UPM と同様に日和見感染を引き起こします。 免疫。

NFZ 因子 (非特異的防御因子)、特に食作用は非常に重要です。感染後の免疫は、すべての日和見感染と同様に、細胞液性で不安定でリラックスしています。 検査室診断。病変からの分泌物の染色塗抹標本では、典型的なブドウ球菌が見られます。しかし、塗抹標本を顕微鏡で観察する場合、非病原性微生物（S.表皮ブドウ球菌、S.saprophyticus）と病原性微生物（黄色ブドウ球菌）を区別することはほとんど不可能です。この目的のために彼らは使用します 文化的手法研究。 LSA を含むカップに材料を播種すると、24 ～ 48 時間のインキュベーション後に、黄色ブドウ球菌 - 黄金色、表皮ブドウ球菌 - 白い大理石など、さまざまな色素を持つ典型的なコロニー (丸く、滑らかで、凸状) が形成されます。血漿凝固反応と並んで、潜在的な病原性を特徴付けるブドウ球菌のもう 1 つの重要な能力、デオキシリボヌクレアーゼ活性が非常に重要になっています。病理学的物質から分離されたブドウ球菌は、原則として DNAse を持っています。担体から得られたコアグラーゼ陽性菌株はこの酵素を欠いている場合があり、通常、デオキシリボヌクレアーゼ活性の欠如は、そのようなブドウ球菌培養物の生化学的能力および毒性原性の低さと組み合わされています。 タイピング黄色ブドウ球菌のバクテリオファージは臨床疫学で広く使用されています。処理ブドウ球菌感染症特異的（不屈性）治療は、抗生物質を必ず考慮しながら、広域抗生物質、半合成ペニシリン（オキサシリン）、セファロスポリンを使用して行われます。重度または慢性の場合には、抗ブドウ球菌免疫グロブリンを使用する必要があります。ブドウ球菌を特異的に溶解する能力を持つブドウ球菌バクテリオファージがあります。 具体的な予防策: 1）外毒素から薬物が得られ、それが妊婦のワクチン接種に使用され、抗毒性免疫が発達し、それが胎盤を介して子供に伝わります。 2) ブドウ球菌ガンマグロブリン - トキソイドで免疫したドナーの血液から得られ、受動免疫を生み出します (治療にも使用されます) 3) ブドウ球菌自己ワクチン - 患者から分離されたブドウ球菌株から得られます。

1. 純粋な細菌培養物を単離するための原理と方法:

21. 細菌の純粋培養物を単離する原理と方法。

純粋培養とは、栄養培地で増殖させた 1 種の細菌の集団です。多くの種類の細菌は、1 つの特性に従って生物学的変異体、つまりバイオバーに分類されます。生化学的性質が異なるバイオバールはケモバール、抗原性の性質が血清型、ファージに対する感受性がファージバールと呼ばれます。

異なる供給源から、または同じ供給源から異なる時期に分離された、同じ種またはバイオバーの微生物の培養物は、株と呼ばれます。診断細菌学研究室における細菌の純粋培養物は、単離されたコロニーから、固体またはあまり一般的ではありませんが液体栄養培地の入った試験管に白金耳で接種することによって得られます。

コロニーは、高密度の栄養培地 (表面またはその深さ) 上で 1 つの細菌細胞が繁殖した結果として形成される、1 種類の微生物の個体の目に見える孤立したクラスターです。異なる種の細菌のコロニーは、その形態、色、その他の特性が互いに異なります。

細菌の純粋培養物は診断研究、つまり微生物の形態学的、文化的、生化学的およびその他の特性を決定することによって達成される同定のために得られます。

細菌の形態学的および着色的兆候は、さまざまな方法および天然の調製物で染色された塗抹標本を顕微鏡検査することによって研究されます。

文化財は、栄養ニーズ、条件、固体および液体の栄養培地での細菌の増殖の種類によって特徴付けられます。それらは、コロニーの形態と文化の成長特性に従って確立されます。

細菌の生化学的特性は、特定の属、種、または変異体に固有の一連の構成酵素と誘導酵素によって決定されます。細菌学の実践では、鑑別診断媒体に基づいて決定される細菌の糖分解酵素とタンパク質分解酵素が分類学的に重要であることがほとんどです。

細菌を属や種に識別するときは、コロニーや培地をさまざまな色で着色している色素に注意してください。例えば、赤色の色素はセラチア・マルセッセンスによって、金色の色素は黄色ブドウ球菌によって、青緑色の色素は緑膿菌によって生成されます。

バイオバール（ケモバール、血清型、ファゴタイプ）を確立するために、対応するマーカーを特定するために追加の研究が行われます-酵素、抗原、ファンに対する感受性の決定。

細菌の純粋培養物を単離する方法。

作物を生産するための普遍的なツールはバクテリアループです。これに加えて、注射による接種には特殊な細菌針が使用され、シャーレ上での接種には金属またはガラスのスパチュラが使用されます。液体材料の接種には、ループとともにパスツールと目盛り付きピペットが使用されます。最初のものは、滅菌した低融点ガラス管からあらかじめ作られており、毛細管の形で炎上で描画されます。キャピラリーの端は、無菌性を維持するために直ちに密閉されます。パスツールピペットと目盛り付きピペットの場合、広い端を脱脂綿で覆い、その後、特別なケースに入れるか、紙で包み、滅菌します。

細菌培養物を再播種するときは、試験管を左手に持ち、右手で指 IV と V で綿栓をつかみ、バーナーの炎の上を通過させて綿栓を取り外します。同じ手の他の指でループを持ち、接種材料を採取し、試験管をストッパーで閉じます。次に、接種材料の入ったループを傾斜した寒天の入った試験管に挿入し、寒天を培地下部の凝縮液まで下げ、材料を寒天の傾斜面上にジグザグに分配します。ループを外した後、試験管の端を焼き、ストッパーで閉じます。ループをバーナーの炎で滅菌し、三脚に置きます。 nadg の培養物が入った試験管には、播種日と接種材料の性質 (研究番号または培養物の名前) が記載されています。

芝生の播種は、ペトリ皿内の栄養寒天上でスパチュラを使用して行われます。これを行うには、左手で蓋を少し開け、ループまたはピペットを使用して寒天培地の表面に種子材料を塗布します。次に、スパチュラをバーナーの炎に通し、蓋の内側で冷却し、材料を媒体の表面全体にこすり付けます。接種のインキュベーション後、細菌の均一な連続増殖が現れます。

2.酵素免疫吸着法（ELISA）酵素免疫測定法は、抗原と抗体の既知の免疫反応に基づいています。これらの試薬の 1 つは分析対象物であり、もう 1 つは認識試薬であり、形成された免疫複合体 (抗原抗体) を識別するために分析対象に対して既知の標準的な特異性 (選択性) を持っています。 トラスマン t、認識コンポーネント (抗原または抗体) を事前に標識します。酵素自体は当然のことながら目に見えないため、ELISA によって測定される物質の存在の可視化は、中間物質を使用することで実現されます。 色原体。これは水によく溶ける特殊な化合物で、溶液は無色です。無色の色原体から有色の物質、発色団への変換は、色原体が基質となる酵素の作用下で起こります。

3. HIV感染症。分類学、病原体の特徴。 検査室での診断、予防。エイズウイルス (HIV） - HIV感染の結果、リンパ球、マクロファージおよび神経組織細胞におけるウイルスの循環が長引く結果として免疫応答の進行性障害の発症によって現れる、特異な感染症の原因物質 - 後天性免疫不全症候群 (エイズ）。 HIV は、レトロウイルス科のレンチウイルス亜科のメンバーです。レトロウイルスの特徴は、独特のゲノム構造と逆転写酵素（RNA依存性DNAポリメラーゼ）の存在です。逆転写酵素（またはリバーターゼ）は、遺伝情報の流れの逆方向、つまり DNA から RNA ではなく、その逆、RNA から DNA を保証します。これが、この科の名前が英語から付けられた理由です。レトロ、バック】。 HIV ゲノム一本鎖の非セグメント化 +RNA の 2 つの同一分子を形成します。 HIV の生殖サイクルは独特で、その実行中に DNA 中間体が形成されるため、現在、次の 2 種類のウイルスが区別されます。 HIV-1(HIV-1) は HIV 感染の主な原因物質であり、 HIV-2(HIV-2) は HIV-1 の毒性が低い類似体であり、典型的なエイズの症状を引き起こすことはほとんどありません。主に西アフリカで孤立している HIV.HIV感染症- 典型的な人為症。この病気は動物では再現できません。 HIV ウイルスの保菌者は感染者です。病原体は主に伝染します。 HIV感染因子- 性的接触（ウイルスは粘膜の損傷を通じて血液に入ります）。 HIV ウイルスの感染における 2 番目に重要な要因は、麻薬中毒者による同じ針と注射器の使用です。 HIVは敏感です高温（56倍では30分で不活化され、70〜80℃では10分後に不活性化されます）、エタノール、エーテル、アセトン、および多くの消毒剤の作用に影響されません。室温の血液やその他の生体物質中では、ウイルスは数日間生存し続けます。 Z.ヒト免疫不全ウイルスの主な抗原- 表面 gp41 および gp120、ならびにコア (核) gp24。 HIV感染の病因ウイルスはCD4分子を受容体として使用するため、病変はCD4+細胞に選択的損傷を引き起こします。 HIV感染の標的- CD4 様分子を発現するヘルパー T 細胞、単球、マクロファージおよび関連細胞。マクロファージの感染は、ウイルスを含む免疫複合体の摂取によっても可能です。 HIV感染症の発症機序の特徴- ウイルス遺伝子の発現を最小限に抑えながらゲノムを宿主細胞の DNA に組み込むことによる免疫機構の作用、および逆転写産物の操作エラーによって引き起こされる抗原の変動を回避する能力 エイズ経過多くのよく知られた感染症の臨床像に似ています。その独自性は、体の特定の細胞に対する病原体の指向性にのみあり、それが感染症を互いに区別します。 HIV感染の潜伏期間効果は 2 ～ 4 週間続きますが、数か月続く場合もあります。 HIV感染の初期症状の段階数日から1～2ヶ月程度続きます。 HIV感染の二次症状の段階（潜伏期間）は数か月から8～10年続きます。 HIV による免疫障害が特徴的です。 後期HIV感染症 CO4+ 細胞数が 50/mm3 未満に徐々に減少する結果として発症する日和見感染症の発症によって現れます。最も典型的なもの。ニューモシスチス肺炎、トキソプラズマ症、カンジダ症（食道および気道の病変）、クリプトコッカス症、ヒストプラズマ症、非定型マイコバクテリア症、全身性CMVおよびヘルペス感染症。後期ステージ終了 エイズ発症. エイズ。特にメディアにおける医学用語の誤った使用の結果、HIV と エイズしばしば誤って同一であると見なされます。 HIV診断の基礎 HIV 感染のさまざまな段階での HIV ウイルスのウイルス特異的 AT および抗原の検出です。 ATからアグビッチへ gp41、gp120、および gp24 は、血清変換期、一次症状の段階から始まり、その後のすべての段階で検出されます。 Ag gp41 および gpl20 hiv初発症状の段階と後期HIV感染の段階で検出されます。 HIV の基本的な診断方法- ELISA および免疫ブロット。 ELISAはHIVを診断するための主な方法です。これにより、ウイルスの Ag と AT を識別できます。 AT 検索は次の場合にはあまり好ましくありません。 HIV の早期診断、感染者の95％ではATは2〜5か月後にのみ現れるためです。 ウェスタンブロット (免疫ブロット) HIV 検査 HIV感染の事実を確認するために使用されます。この方法では、血清中の特定の AT を検出できますが、結果は、p24、p31、および gp41 または gp120 に対する代替アプローチの検出後に陽性と見なされます。 HIV感染症の診断。 AT を検出する方法は、実際には受け入れられません。 HIV診断母親の IgG は 1 歳以上の子供の血清中に存在する可能性があるため、新生児では使用できません。 HIV 診断アプローチインビトロでのウイルスの単離と、PCR を使用した病原体の遺伝物質の検出が含まれます。結果は、感染した生後 1 週間未満の新生児の 35 ～ 55%、生後 3 ～ 6 か月の小児の 90 ～ 100% で陽性となります。

1.真菌生理学の特徴:菌類は真核生物に属します。彼らの細胞構造は植物や動物の細胞構造に似ています。これは、形態学的に形作られた核、分岐小胞体、ミトコンドリアおよび他の細胞小器官を形成する細胞内膜システムのおかげで、それらの細胞が構造化 (区画化) されていることを意味します。核には、有糸分裂を通じて複製する一連の染色体が含まれています。すべての真核生物と同様に、真菌の原形質膜はステロール (主にエルゴステロール) の含有量が高いことを特徴としています。さらに、真菌は有性生殖 (有性胞子の形成) が可能です。すべての菌類は好気性菌であり、発酵によって生き残ることができる菌類はほんのわずかですが、同時に、菌類は「古典的な」（高等）真核生物よりもはるかに原始的です。これは主に、細胞を構成する細胞の特殊化が低いことに現れます。多細胞菌類 (カビなど) であっても、個々の細胞が生物全体を生み出すことができます。高等真核生物とは異なり、ほとんどの真菌は一倍体です（「薬用」真菌の中でカンジダだけが二倍体です）。この点で、菌類は（原生動物や藻類とともに）「原生生物」と呼ばれることもあります。下等真核生物。古い分類では、キノコは「クロロフィルを含まない植物」として分類されていました。しかし、多くの基本的な特徴において菌類は植物とは根本的に異なるため、この類似性は形式的なものであることが判明しました。キノコは化学栄養生物であり、食物の化学結合からエネルギーを抽出します（キノコが暗闇でもよく成長するのはこのためです）。植物は、光合成を通じて太陽光のエネルギーをマクロエネルギー（ATP）に変換する光栄養生物です。菌類は従属栄養生物です。それらの代謝は有機化合物、通常は「死んだ」有機物質（ほとんどの菌類は腐生菌）の利用に基づいています。植物は古典的な独立栄養生物であり、無機形態の炭素 (CO 2) や他の有機体を犠牲にして自らを複製します。

2.免疫学的記憶。免疫学的寛容:免疫学的記憶。再び抗原に遭遇すると、体はより活発で迅速な免疫反応、つまり二次免疫反応を形成します。この現象はと呼ばれます 免疫学的記憶。免疫記憶は特定の抗原に対して高い特異性を持ち、体液性免疫と細胞性免疫の両方にまで及び、B リンパ球と T リンパ球によって引き起こされます。それはほとんど常に形成され、何年も、さらには数十年も持続します。そのおかげで、私たちの体は繰り返しの抗原介入から確実に守られています。 現在、最も可能性の高い 2 つのメカニズムが検討されています。 免疫学的記憶の形成。そのうちの 1 つは、抗原を体内に長期保存することです。これには多くの例があります。結核のカプセル化された病原体、麻疹、ポリオ、水痘、その他の病原体の持続性ウイルスは、長期間、場合によっては生涯を通じて体内に残り、免疫システムの緊張状態を保ちます。また、抗原を長期間保存して提示できる長命の樹状 APC が存在する可能性も考えられます。また、別のメカニズムにより、体内で生産的な免疫応答が発生する際に、一部の抗原反応性 T リンパ球または B リンパ球が分化することが考えられます。小さな休止細胞に、または 免疫学的記憶細胞。これらの細胞は、特定の抗原決定基に対する高い特異性と長い寿命 (最長 10 年以上) を特徴としています。それらは体内で活発にリサイクルされ、組織や器官に分布しますが、ホーミング受容体により常に元の場所に戻ります。これにより、二次的な抗原との繰り返しの接触に対して免疫系が常に応答できる状態が確保されます。

免疫記憶の現象は、強力な免疫を生成し、それを保護レベルで長期間維持するために人々にワクチンを接種する際に広く使用されています。これは、一次ワクチン接種中に 2 ～ 3 回のワクチン接種と、ワクチン製剤の定期的な繰り返し注射によって達成されます。 再ワクチン接種.

しかし、免疫学的記憶の現象にはマイナス面もあります。たとえば、一度拒絶反応を起こした組織を移植しようと繰り返し試みると、迅速かつ激しい反応が引き起こされます。 拒絶の危機。免疫寛容- 免疫応答および免疫学的記憶とは反対の現象。これは、免疫抑制とは対照的に、免疫担当細胞が特定の抗原に対して最初は無反応であることを前提としています。

免疫寛容は、と呼ばれる抗原によって引き起こされます。 寛容原。それらはほとんどすべての物質でありえますが、多糖類が最も寛容原性が高いです。

免疫寛容が起こる先天性と後天性。例 生来の耐性それは、それ自体の抗原に対する免疫系の反応の欠如です。 獲得耐性免疫系を抑制する物質（免疫抑制剤）を体内に導入することによって、または胎児期または個体の誕生後最初の数日間に抗原を導入することによって生成されます。獲得された耐性には、能動的または受動的なものがあります。 アクティブな許容誤差免疫寛容原を体内に導入することによって作られ、特定の寛容を形成します。 受動的耐性免疫担当細胞の生合成または増殖活性を阻害する物質（抗リンパ球血清、細胞増殖抑制剤など）によって引き起こされる可能性があります。免疫寛容は特異的である- 厳密に定義された抗原を対象としています。有病率に応じて、多価耐性と分割耐性が区別されます。 多価耐性特定の抗原を構成するすべての抗原決定基に応答して同時に起こります。のために スプリット、または 一価、許容差いくつかの個々の抗原決定基に対する選択的免疫を特徴とします。免疫寛容の発現の程度は、マクロ微生物と寛容原の多くの特性に大きく依存します。抗原の用量とその曝露期間は、免疫寛容の誘導において重要です。。高用量耐性と低用量耐性があります。 高線量耐性大量の高濃度抗原の導入によって引き起こされます。 低い線量耐性、それどころか、非常に均一な分子抗原が微量に存在することによって引き起こされます。 寛容のメカニズムそれらは多様であり、完全には解読されていません。それは免疫系の正常な調節プロセスに基づいていることが知られています。免疫寛容の発症には、最も可能性の高い 3 つの理由があります。1. 身体からの抗原特異的リンパ球クローンの除去２．免疫担当細胞の生物学的活性の遮断３．抗体による抗原の迅速な中和。

3. 百日咳およびパラ百日咳の原因物質。分類と特徴。微生物診断。具体的な予防と治療百日咳は、特徴的なけいれん性咳嗽を伴う急性感染症です。百日咳の原因菌であるボルデテラ・パラ百日咳菌は、アルコリゲン科ボルデテラ属に属します。形態と着色特性。細菌は長さ 2 ミクロンまでの棒状で、卵形で不動で、胞子を形成しません。特殊な染色により、百日咳の原因物質が繊細なカプセルを明らかにします。従来のアニリン染料、グラム陰性菌で簡単に染色できます。ボルデテラは、特別な栄養培地、つまり 20 ～ 25% のヒト血液を含むジャガイモ - グリセリン寒天培地 (ボルデ - ゲンゴウ培地) およびカゼイン - 木炭寒天 (CAA) で培養される好気性菌です。付随する微生物叢の増殖を抑制するために、ペニシリンが培地に添加されます。ボルデ-ゲンゴウ培地上の百日咳菌とパラ百日咳菌は、水銀の液滴に似た小さな光沢のある凸状のコロニーと、AMC 上の灰色がかったクリーム色のコロニーを形成します。どちらのタイプの細菌も溶血特性を持っています。パラ百日咳菌のコロニーは百日咳菌と外観が非常に似ていますが、百日咳菌のコロニーよりもサイズが大きく、出現が早いのが特徴です。百日咳菌は解離することができます。新たに分離された培養物は、特徴的な形態学的および生物学的特性を備えた S 型 (フェーズ I) です。フェーズ II と III は過渡的なものです。第 IV 相の細菌は R 型に属し、病気の終わりに向けて患者から分離されます。百日咳の細菌学的診断に対して肯定的な答えが得られるのは、フェーズ I で微生物が検出された場合のみです。 抗原構造と毒素形成。細菌は複雑な抗原構造を持っています: B. 百日咳には 8 つの凝集原があり、その代表的なものは 1.2.3 です。主要な凝集原の存在に応じて、4 つの血清型 (1.2.0、1.0.3、1.2.3、および 1.0.0) を区別するのが通例です。さらに、過去 10 年間では、血清型 1.2.0 および 1.0.3 が優勢であり、軽症および非定型の疾患を患うワクチン接種済みの小児から分離されています。同時に、血清型 1.2.3 はワクチン接種を受けていない小児、主に若年層から分離されており、この病気は重症で発症することが多く、中等度で発症することはあまりありません。生物学的に活性な物質が含まれています。 有毒な性質：熱不安定性皮膚壊死性物質、熱安定性（エンドトキシン）、血球凝集素、

ヒスタミン感作因子、防御（防御）抗原、リンパ球刺激因子。抵抗。細菌は外部環境ではあまり安定していません。それらは乾いた痰の中に数時間残ります。 55〜60℃の温度では15〜30分以内に死に、消毒剤や日光の作用に敏感であり、感染の入り口は気道の粘膜です。免疫。百日咳は一度罹患すると生涯にわたって持続します。 伝達機構- エアロゾル; 感染経路は空気感染です。 臨床検査診断。細菌学的方法では、空腹時または食後 2 ～ 3 時間後に採取された咽頭後壁の粘液から百日咳菌を分離します。 .「咳止めプレート」法と「後咽頭ぬぐい液」法の2つの方法が使用されます。接種はカゼイン炭寒天上で行われる。百日咳菌とパラ百日咳菌の同定と区別は、文化的、生化学的、抗原的特性に従って行われます。血清学的方法 (RPGA、RA、RNGA) は、百日咳の後期段階での診断や、疫学分析 (感染巣を調べる場合) に使用できます。酵素結合免疫吸着検定法 (ELISA) により、 コンテンツを定義する Ig M クラス (疾患の初期段階) および Ig G (疾患の後期段階) の抗体を使用して百日咳を診断する方法 (免疫蛍光、ラテックス微小凝集反応)。防止百日咳の能動予防接種には、百日咳・ジフテリア・破傷風吸着型ワクチン（DTP）が使用され、生後3か月から1か月半の間隔で3回接種されます。必要に応じて、ワクチン接種の間隔を6か月まで、例外的な場合には最大12か月まで延長することができます。再接種は接種終了後1年半～2年後に1回行われます。百日咳に対する2回目の再ワクチン接種は行われません。

1.細菌酵素:、加水分解酵素、水分子を加えることによってタンパク質、炭水化物、脂質の分解を引き起こします。

酸化還元反応を触媒するオキシドレダクターゼ。

トランスフェラーゼは、分子から分子への個々の原子の移動を実行します。

非加水分解的な方法で化学基を除去するリアーゼ。

炭水化物代謝に関与するイソメラーゼ。

細胞の生合成反応を促進するリガス。

細菌の酵素は外酵素と内酵素に分類されます。外酵素は細菌細胞によって細胞外消化のために環境中に放出されます。このプロセスは、栄養素の高分子を単純な化合物（グルコース、アミノ酸、脂肪酸）に分解する加水分解酵素の助けを借りて実行されます。このような化合物は細胞膜を自由に通過でき、透過酵素の助けを借りて細胞質に移動して代謝に参加し、炭素とエネルギーの源となります。一部の外酵素は保護機能を果たします。たとえば、多くの細菌によって分泌されるペニシリナーゼは、細胞が抗生物質ペニシリンにアクセスできないようにします。

エンド酵素は、細胞内で起こる代謝反応を触媒します。

細菌酵素も構成性酵素と誘導性酵素に分類されます。構成酵素は、培地中の基質の存在に関係なく細胞によって合成される酵素であり、誘導性酵素は、培地中に対応する誘導化合物、つまりこの酵素の基質が存在する場合にのみ細菌によって形成されます。たとえば、大腸菌のゲノムには乳糖を分解する能力が含まれていますが、環境中に乳糖が存在する場合にのみ、細胞はその加水分解を触媒する酵素を合成します。

アロステリックと呼ばれる酵素も知られています。活性中心に加えて、酵素分子内の活性中心から空間的に離れた調節中心またはアロステリック中心があります。この中心に結合する分子は構造が（立体的に）基質と似ていないが、活性中心の基質の結合と変換に影響を及ぼし、その活性中心を変化させるため、アロステリック（ギリシャ語のアロス（異なる、外来）に由来する）と呼ばれます。構成。

病原性細菌は、代謝酵素に加えて、病原性因子である攻撃酵素も持っています。これらの酵素には次のものがあります。

ヒアルロニダーゼ、

デオキシリボヌクレアーゼ、

コラゲナーゼ、

ノイラミニダーゼなど

実験室条件では、微生物は栄養培地で増殖します。栄養培地は、無菌、透明、湿っていて、特定の栄養素 (タンパク質、炭水化物、ビタミン、微量元素など) を含み、一定の緩衝能、適切な pH、および酸化還元電位を備えている必要があります。。栄養培地は、液体、半液体、濃厚（固体）の粘稠度によって分類されます。起源 - 動物または植物起源、および特定の化学的に純粋な化合物から正確に指定された濃度で調製された合成培地。目的別 - 一般的に使用される (ユニバーサル)、差分、選択および強化メディア、特別なメディア。

従来の（単純な）培地は、多くの種類の病原性細菌および非病原性細菌の培養に適しています。これらには、ミートペプトンブロス (MPB)、ミートペプトン寒天 (MPA)、ミートペプトンゼラチン (MPG) が含まれます。ミートペプトン寒天は、ミートペプトンブロスに 1 ～ 2% の工場寒天を加えて調製されます。これにより、冷却すると栄養培地が濃密なゼリーの粘稠度になります。寒天は特定の藻類から得られます。

差分培地を使用すると、文化的および生化学的特性に従って、異なる種および属の細菌を区別することができます。これらには、ミートペプトンゼラチン、ヒス、エンドウ、血液寒天、プロスキレフのバクト寒天 (Bactoagar Zh) などが含まれます。

特定の種類の細菌の増殖を促進し、他の微生物の増殖を抑制する選択的（選択的）環境および濃縮環境。これらには、結核菌を増殖させるためのペトラニャーニおよびゲルベルグ卵培地、パラ結核の原因物質を増殖させるために A.P. アリカエバによって改変されたデュブスミス培地などが含まれます。

特殊な培地は、一般的に使用される培地では繁殖しない細菌の増殖に最適です。これらには、血液寒天、血清寒天、ホエーブロス、Kitt-Tarozzi 培地 (MGSHB)、サブロー培地などが含まれます。

固体栄養培地上では、微生物はさまざまな形や大きさのコロニーを形成します。コロニーは、1 つまたは複数の細胞からの繁殖の結果として形成される、同じ種類の微生物の個体の目に見えるクラスターです。

コロニーはサイズによって特徴付けられます - 大（最大4 mm）、中（2〜4 mm）、小（1〜2 mm）。円形、楕円形、泡状、枝分かれした形状（栄養状態やその他の環境の影響によって異なります）。表面 - 光沢があり、マットで、不均一で、しわがあり、折り畳まれており、脳の形をしており、滑らかで、縞模様があります。透明性 - 透明、曇り、乳白色。粘稠度 - 粘稠、粘稠、もろい、粉っぽい、角のような。エッジ - 滑らか、ごつごつ、縁取りがあり、不均一、裂け目、カール状、湾状、腐食、ぼやけています。プロファイルまたはレリーフ - 平ら、盛り上がった、凸状、くぼんだ、ドーム状。構造 - 均質（均質）、粒状。顔料 - いいえ、はい、何色ですか。匂い - 存在しない、鋭い、それを思い出させます。研究は巨視的（サイズ、形状、色、透明度）および微視的（コロニーの構造と端）で行われます。

液体栄養培地で栽培された作物では、表面の成長が研究されます（壁リング、フィルム、フレーク、それらの性質）。濁度 - 弱い、中程度、強い、持続性、通過性。沈殿物 - 緻密で、綿状で、粒状で、綿毛の形をしています。その量は豊富だが少ない。カラーI

さまざまな微生物の繁殖の特殊性。原生動物スピロヘータの培養には、天然タンパク質（血清、血液）、新鮮な器官および組織片（ウサギの腎臓、ニワトリの脳組織）を含む栄養培地、および特定のアミノ酸からなる合成栄養培地が使用されます。

病原性真菌の培養には、原則として、弱酸性または酸性反応（pH 6.8〜4.5）の選択培地が使用されます。選択性は、栄養素を選択し、細菌叢の増殖を抑制するために培地に抗生物質または色素を添加することによって達成されます。最適な培養温度は 30 ～ 33 ℃です。固体のサブロー培地、ビール麦汁寒天などが広く使用されています。液体培地の中でも、砂糖ブロス、ビール麦汁、Czapek-Dox 培地、pH 6 ～ 6.8 がよく使用されます。

マイコプラズマは、その構造的特徴により、栄養培地にあまり適応しません。菌株によっては培地に濁りを引き起こすものもあれば、軽い膜を形成する菌株もあります。栄養培地の上層で成長するものもあれば、底部で成長するものもあります。固体栄養培地上では、マイコプラズマは目玉焼きに似た特徴的なコロニーを形成します。同時に、一次作物では3〜7日目に成長が始まりますが、適応株ははるかに速く成長します。

微生物の色素、燐光物質、芳香生成物質の合成。微生物は、生命活動の過程で、細菌培養のコロニーにさまざまな色や色合いを与える色素、つまり微生物を区別する際に考慮される色素を合成します。赤い色素（放線菌、酵母菌、真菌、「素晴らしい棒」 - Bact. prodigiosum）、黄色またはオレンジ色（結核菌、サルシナ、ブドウ球菌）、青（緑膿菌 - Pseudomonos aeraginosa、青い乳菌 - Bact. syncyaneum）、紫（Chromobacterium violaceum）、黒（いくつかの種類の菌類、酵母、土壌微生物）。色素の形成は、酸素の存在下、室温および低光下で発生します。微生物は食品（牛乳、チーズ、肉、魚、バター、カッテージチーズ）上で発生し、色を変えます。

水に溶ける色素（緑膿菌、青緑色のミルクバクテリア - ピオシアニン、シンシアニン）、アルコールに溶ける色素（「素晴らしい」細菌、ブドウ球菌、サルシンの色素 - 赤、金色、レモンイエロー、黄色）、不溶性の色素があります。水、アルコール中（酵母、真菌、アゾトバクターの黒色色素）は環境中に放出され（色素）、微生物の体内に残ります（発色団）。

微生物の生活における色素の生理学的重要性は十分に研究されていません。色素形成微生物が物理化学的および生物学的要因の作用に対してより耐性があることは十分に確立されています。

発光微生物（光細菌）は、細菌細胞内の酸化プロセスにより、光る（発光）能力を持っています。光細菌は厳密な好気性菌であり、酸素の供給が遮断されると発光が止まります。自然界で観察される腐った昆虫、老木、肉、魚の鱗、発光するシロアリ、アリ、クモ、その他の物体の輝きは、それらの中に光細菌が存在することで説明されます。その中には、球菌、ビブリオ、いくつかの真菌、細菌が含まれます。それらは、通常の栄養培地、魚および肉基質上で15〜37℃の温度でよく発育します。光バクテリアの代表的なものはフォトバクテリウム・フォスフォレウムである。病原性光細菌は見つかりませんでした。

香料生成微生物は、ワイン、ビール、乳酸製品、干し草、土壌などに芳香特性を与える酢酸エチルや酢酸アミルエステルなどの揮発性芳香物質を生成する能力を持っています。芳香生成細菌の代表的なものです。は、乳酸製品の製造に広く使用されている Leuconostoc cremoris です。

微生物の培養は微生物学の主要な方法の 1 つです。研究と実用化の成功は、実験室条件で微生物を培養できるかどうかに大きく依存します。培養は、微生物の生理学的および生化学的特性に関する知識と、微生物の生命活動にとって物理的および化学的環境条件の重要性の理解に基づいています。

微生物の培養のための培地の編集の原則

実験室条件では、微生物は栄養培地で培養されるため、栄養培地には微生物の増殖に必要なすべての物質が含まれていなければなりません。微生物の培養には何百もの異なる培地が提案されており、その組成は生合成とエネルギー生産に必要な化合物に対する微生物のニーズによって決まります。微生物の建設的でエネルギー的なプロセスは非常に多様であるため、微生物の栄養ニーズも同様に多様です。これからしたがって、例外なくすべての微生物の増殖に等しく適した万能培地は存在しないということになります。

微生物を培養するための栄養培地の主成分は炭素と窒素の化合物です。そして大部分の栄養培地の特異性を決定するのはこれらの化合物です。

微生物は、炭素の必要性に基づいて、通常、独立栄養生物と従属栄養生物の 2 つの大きなグループに分類されます。

独立栄養微生物は、最も酸化された形で炭素を含む化合物である二酸化炭素を唯一の炭素源として使用することができます。これによると、独立栄養生物を培養する場合、空気中の二酸化炭素濃度は0.03％を超えず、拡散による環境への二酸化炭素の侵入は微生物の集中的な増殖には十分ではないため、細胞に二酸化炭素を供給する必要があります。。したがって、独立栄養生物を培養するには、重炭酸ナトリウム (NaHC) または炭酸塩、ほとんどの場合炭酸カルシウム (CaC) が培地に添加されます。場合によっては、人工的に 1 ～ 5% の二酸化炭素を富化させた空気を培地に吹き込みます。

従属栄養微生物の要求は二酸化炭素だけでは満たされません。それらが発達するには、環境に有機化合物が含まれている必要があります。従属栄養微生物は、個々の特性に応じて、酸、アルコール、炭水化物、炭化水素、芳香族化合物など、さまざまな炭素化合物を使用できます。同時に、いくつかの微生物、たとえば家族の多くの細菌のニーズも満たされます。 シュードトナダ科、他の微生物は、高度に特殊化され、少数の炭素化合物のみを使用する能力を特徴とするため、メタンとメタノールのみを使用するメタン酸化細菌もあります。

成長培地の 2 番目の主成分は窒素源です。窒素は、主に還元された形、つまりアミノ (-N) またはイミノ (-NH) 基の形で細胞の有機物質の一部です。それにもかかわらず、窒素源に対する微生物の必要性は、窒素の還元度が異なるさまざまな窒素含有化合物によって満たすことができる。多くの微生物にとって、これらはアンモニウム塩である可能性があります。この場合、培地にはNClまたは(N)Sが添加されます。ただし、アンモニウムイオンが使用されると、対応する酸の陰イオンが媒体中に蓄積するため、アンモニウム塩は生理学的に酸性の塩であることを忘れないでください。これは環境の酸性度の顕著な増加につながり、微生物の発育に悪影響を与える可能性があります。水酸化アンモニウム (NNOH) は、栄養培地の強アルカリ化を引き起こすため、窒素源としてはほとんど使用されません。

かなりの数の微生物の窒素需要は硝酸塩によって満たされます。このような微生物を培養するための栄養培地には、KNO または NaNO が含まれています。アンモニウム塩とは異なり、硝酸塩は生理学的にアルカリ性の塩です。これは、NO アニオンを使用すると K+ または Na+ カチオンが培地中に蓄積するためです。亜硝酸塩は酸性条件下では多くの微生物にとって有毒であるため、窒素源として使用されることはほとんどありません。

窒素要求量が高く、したがって生合成能力が低い微生物の培養用の栄養培地には、1 つ、複数、または完全なアミノ酸のセットが含まれていなければなりません。 L 型または DL 型の個々のアミノ酸は、微生物を接種する直前に、100 ml あたり 0.1 ～ 0.05 g の濃度で滅菌培地に添加されます。これを行うには、培地中のアミノ酸含有量の 100 倍を超える濃度のアミノ酸溶液を使用することをお勧めします。グリシン、アラニン、プロリン、リジン、オルニチンは蒸留水に溶解し、フェニルアラニンとトリプトファンは蒸留水に溶解してNaOHでアルカリ化し、残りのアミノ酸は蒸留水に溶解してHClで酸性化します。アミノ酸（シスチン、システイン）、アミド類（グルタミン、アスパラギン）は熱に不安定なため、ろ過滅菌します。残りのアミノ酸は0.5気圧で15分間滅菌可能です。

いくつかのアミノ酸に対する微生物の必要性は、多くの場合、培地にタンパク質加水分解物を添加することによって満たされます。加水分解物を得るには、動物（肉、魚、ゼラチン、カゼイン）または植物（大豆、ヒマワリの種）由来のタンパク質、および微生物細胞（酵母、藻類、細菌）が使用されます。加水分解は、タンパク質分解酵素を使用するか、鉱酸または酸性アルカリと煮沸することによって行われます。加水分解物の組成は同じではなく、最初の基質および調製方法によって異なります。ほとんどの場合、カゼイン加水分解物が使用されます。カゼイン加水分解物は、通常は酸加水分解によって実験室で調製されます。これを行うには、20 gのカゼインを200 mlの水に注ぎ、10 mlの濃HSO を加え、オートクレーブ内で1.5気圧で4時間保持します。しかし、これはオートクレーブ装置の腐食を引き起こすため、カゼイン加水分解物が異なる方法で得られることがよくあります。カゼイン200gに280を加える６ＮＨＣｌ溶液１ｍｌを加え、混合物を１８時間還流して、得られた加水分解物を５０％ＮａＯＨ溶液でｐＨ７に中和し、濾過する。ペーパーフィルターでろ過し、0.5気圧で30分間滅菌します。このようにして得られる加水分解物中のアミン窒素含有量は、１００ｍｌ当たり７００〜１０００ｍｇである。アミン窒素濃度が 100 ml あたり 10 ～ 30 mg になるような量で培地に添加されます。留意すべきことは、酸加水分解中、トリプトファンは完全に破壊され、システインはかなりの程度まで破壊され、セリンとスレオニンはわずかに破壊されます。カゼイン加水分解物の既製の調製物があります。微生物の必要性に応じて、100 ml あたり 0.1 ～ 1.0 g の範囲で培地に添加されます。

最も要求の厳しい微生物は、タンパク質またはその不完全な分解生成物であるペプトンを含む栄養培地で培養されます。ペプトンは、ポリペプチドおよびオリゴペプチド、アミノ酸、有機窒素塩基、塩、微量元素の混合物です。これらは、動物性（筋肉タンパク質、カゼイン）または植物性（大豆粉）由来のタンパク質に対するタンパク質分解酵素の作用の結果として得られます。国内の研究所では、セミパラチンスク工場で生産される酵素ペプトンが最もよく使用されています。淡黄色の吸湿性のある粉末です色、水に完全に溶けます。ペプトンの 1% 溶液は中性またはわずかに酸性の反応を示します。ペプトンは、1リットルあたり1〜2〜20 gの量で栄養培地に添加されます。

微生物はアミノ酸とペプトンを窒素源としてだけでなく炭素源やエネルギー源としても利用できることを心に留めておく必要があります。

一部の細菌は窒素分子 - N - を唯一の窒素源として使用できます。これらは窒素固定剤です。このような微生物を培養する場合、培地に窒素化合物を添加することはできない。窒素固定剤は、培地を空気と接触させるか、窒素雰囲気下で培養することにより窒素ガスを供給する。

炭素と窒素の供給源に加えて、多くの微生物は環境中にビタミン、プリン、ピリミジン、アミノ酸などのいわゆる成長因子の存在を必要とします。成長因子に対する微生物の必要性を強調するために、慣例的に「原栄養株」および「栄養要求株」という用語が使用されます。原栄養生物には成長因子は必要ありませんが、栄養要求生物には環境中に 1 つ以上の成長因子が存在することが絶対に必要です。これらの用語は、遺伝学の文献で特に広く使用されています。微生物の成長因子の必要性が 1 つ以上のビタミンによって制限されている場合は、次の濃度でそれらを培地に添加することをお勧めします: チアミン (ビタミン B)、パントテン酸 Ca、リボフラビン (ビタミン B)、ニコチン酸 (ナイアシン）、ピリドキシン、ピリドキサミン、コリン、コバラミン（ビタミンB） - 培地1 mlあたり1 mcg。葉酸およびn-アミノ安息香酸 - 培地1mlあたり0.05μg。ビオチン - 培地 1 ml あたり 0.005 mcg。

ビタミンは、接種の直前に滅菌培地に添加されます。これを行うには、ビタミンの濃度が栄養培地中の含有量を100倍超える溶液を使用することをお勧めします。溶液は滅菌容器で調製され、滅菌蒸留水が使用されます。例外はリボフラビンと葉酸です。リボフラビンは0.02N酢酸に溶解し、葉酸は0.01N NaOHに溶解して調整します。溶液中のNaOH濃度は最大0.001 N。得られた溶液を沸騰水浴中で３分間加熱することにより滅菌する。チアミンは加熱すると破壊されるため、チアミン溶液はろ過滅菌することをお勧めします。 +4の温度では、ビタミン溶液は少なくとも1か月間保存されます。葉酸溶液。ピリドキシンとリボフラビンは感光性があるため、暗所で保管します。

成長因子を含む混合物の例には、酵母抽出物、酵母自己消化物、およびトウモロコシ抽出物が含まれる。酵母エキスを培地に0.05から添加 100 mlあたり最大0.5 g、酵母自己消化物 - アミン窒素の濃度が培地100 mlあたり5〜30 mgになるような量。酵母エキス

販売可能。酵母自己消化物は次のように調製されます。 40 g の新鮮な圧搾酵母または 10 g の乾燥酵母に水を注ぎ、均質な塊が得られるまで撹拌し、次にチモールの結晶数個または 1 ～ 2 ml のクロロホルムを加え、サーモスタット内に保管します。 50〜55で3日間。この間、酵母細胞は死滅しますが、酵素は活性を維持し、タンパク質や他の生体高分子を加水分解します。 3日後、得られた自己消化物をよく混合した後、弱火で20分間煮沸し、ブフナー漏斗を使用して紙パルプを通して濾過します。アミン窒素含有量は正式な滴定によって測定されます。酵母自己消化物は、0.5気圧で15分間滅菌され、冷蔵庫に保存されます。

トウモロコシ抽出物はでんぷんおよび水あめ産業工場の最終製品です。アミノ酸、ビタミン、かなり大量の有機酸（乳酸、酢酸、ギ酸）、ミネラル塩が含まれています。トウモロコシ抽出物を培地に 10 ml あたり 0.5 ～ 5 g 添加します。 0.5気圧で滅菌済み。

微生物は、炭素、窒素、成長因子の供給源に加えて、細胞物質を構築するために硫黄、リン、その他多くの元素を必要とします。それらはすべて、微生物がアクセスできる形で栄養培地に含まれていなければなりません。硫黄、リン、その他の灰分元素に対する微生物のさまざまなグループのニーズは、通常、無機塩によって満たされます。したがって、多くの微生物を培養するための培地のいわゆる「ミネラルバックグラウンド」は、組成が類似している可能性があります。したがって、細胞内では硫黄は主に還元された形、つまりスルフヒドリル基の形で見出されますが、大多数の微生物の硫黄の必要性は硫酸塩によって満たされます。環境中の還元された硫黄の存在を必要とする微生物は、はるかに一般的ではありません。この場合、硫化物 (ほとんどの場合 NaS)、またはシステインなどのスルフヒドリル基を含む有機化合物が培地に添加されます。

リン酸塩は微生物のリンの必要量を満たします。 K、Na、Ca、Mg、Fe、Mn、Co、Cuなどの必要な金属はすべて、微生物によって無機塩のカチオンまたはアニオンの形で得られます。たとえば、マグネシウムの供給源は MgSO、ナトリウムと塩素の供給源は NaCl、カルシウムは CaCO または CaCl です。鉄は塩化物、硫酸塩、またはクエン酸塩の形で培地に添加されます。

一部のカチオン、特に鉄やカルシウムとの不溶性リン酸塩錯体の形成による沈殿を避けるために、0.001 ～ 1 g/l のエチレンジアミン四酢酸 (EDTA) または濃度 4 g/l のヘキサメタリン酸ナトリウムを添加することをお勧めします。メディアに。これらの化合物とカチオンによって形成される錯体は、解離の結果として遊離カチオンが溶液に入る予備として機能します。

カリウム、マグネシウム、カルシウム、鉄は比較的大量に必要とされるため、通常はそれらの塩が栄養培地に含まれます。微生物がマンガン、モリブデン、亜鉛、銅、コバルトを必要とする量は非常に少ないです。これらの元素は微量元素と呼ばれることがあり、1 mg から培地に添加されます。 1リットルあたり最大1μg。高濃度では有毒になる可能性があります。ペプトン、土壌抽出物、酵母抽出物、カゼイン加水分解物を含む栄養培地には、必要な微量元素が含まれています。これらは、蒸留水で調製した合成培地に添加する必要があります。さまざまな微生物に対する微量元素の最適濃度についてはほとんどわかっていないため、異なる組成の微量元素の混合物が提案されています。

Drews (Drews、1976) による微量元素の混合物、mg: EDTA Na-800; MnCl*4HO-10; CoCl*6HO-4; CuSO-1; NaMoO*2HO - 3;ZnCl-2; LiCl - 0.5; SnCl * 2H0; - 0.5; NVO-1、KVg-2; KJ-2; BaCl-0.5; 蒸留水 - 1000 ml; pH6.0。この溶液を培地 1 リットルあたり 5 ～ 10 ml 加えます。

Pfennig (Pfennig、1965) による微量元素の混合物、mg: EDTA-500; FeSO*7HO-200; ZnSO*7 HO-10; MnCl.4HO-3; HBO-30 ; CoCl*2HO - 20 ; CuCl*2HO - 1; NiCl*6HO - 2; NaMoO*2 HО - 3; 蒸留水 - 1000 ml。培地 1 リットルあたり 1 ～ 10 ml を添加します。この解決策。微量元素の溶液を個別に滅菌し、接種する直前に培地に添加することをお勧めします。

微生物の培養のための栄養培地には、生合成プロセスに必要な化合物に加えて、エネルギー物質も含まれている必要があります。エネルギーを得る方法に基づいて、すべての微生物は通常、化学栄養生物と光栄養生物の 2 つの主要なグループに分類されます。

化学栄養生物は、さまざまな化合物の酸化エネルギーを使用します。酸化基質 (水素供与体) に応じて、化学栄養生物の中でも化学有機栄養生物と化学有機栄養生物が区別されます。前者は、HS、S、またはその他の不完全に酸化された硫黄化合物、H、NH+、NO-、Fe などの無機化合物を酸化します。化学分解栄養細菌の培養用培地中のこれらの化合物は、主にエネルギー物質としての機能を果たします。化学有機栄養生物の場合、エネルギー基質は有機物質であり、通常、炭素源とエネルギー源の両方の役割を果たします。しかし、建設的でエネルギー的なプロセスのために異なる化合物を必要とする微生物もいます。例えば、ホモ発酵乳酸菌は糖の発酵からエネルギーを得ますが、生合成過程ではほとんどエネルギーを利用しません。建設的な目的のために、既製のアミノ酸、プリンまたはピリミジン塩基、ビタミンが必要です。

光栄養生物は光エネルギーを使用します。これらの細菌のエネルギー需要を満たすために、細菌は日光または人工光の下で培養されます。

組成に基づいて、天然または不確実な組成の天然培地と合成培地を区別するのが通例です。

自然通常、動物または植物由来の産物からなる培地を指します。このような培地には、野菜または果物のジュース、動物組織、希釈血液、牛乳、海水、湖および鉱泉、肉、土壌、肥料、植物のさまざまな部分、および微生物細胞などの天然基質から得られる煎じ薬または抽出物が含まれます。

天然培地には成長と発育に必要なすべての成分が含まれているため、多くの微生物は天然培地でよく発育します。しかし、これらの培地は複雑で変化しやすい化学組成を持ち、多くの成分の消費や代謝産物の形成を考慮することが難しいため、微生物の代謝の研究にはほとんど役に立ちません。天然培地は主に微生物培養の維持、バイオマスの蓄積、および診断目的に使用されます。研究室で広く使用されている天然培地には、ミートペプトンブロス、ホップ抜きビール麦汁、酵母およびジャガイモ培地、土壌抽出物などがあります。

肉 - ペプトンスープ (MPB)。その準備の基本は肉水であり、通常は次のように準備されます。骨、脂肪、腱を除いた肉500 gを細かく刻むか、肉挽き器に通し、1リットルの水道水に注ぎ、部屋に置いておきます。温度を12時間、またはサーモスタット内で30時間 6時間、そして37で2時間この間に、水溶性ビタミンを含むさまざまな物質が肉から抽出されます。次に、肉をチーズクロスで絞り、得られた注入液を30分間煮ます。この場合、タンパク質が凝固します。冷却した塊を綿フィルターで濾過し、水を加えて元の体積にする。に 1% ペプトンと 0.5% NaCl を肉水に加えます。

MPB は栄養豊富な培地ですが、炭水化物はほとんど含みません。必要に応じて、それらはほとんどの場合、100 mlあたり1〜2 gの量でMPBに追加されます。 MPBは1気圧で滅菌されています。

モルト（ホップなしビール）の麦汁は、一部の乳酸菌、酢酸菌、酵母菌、顕微鏡的真菌、およびその他の従属栄養微生物の代表にとって良好な環境です。麦汁の主成分は炭水化物（乾燥残渣の総質量の最大 90%）と窒素含有化合物（乾燥残渣の総質量の最大 6 ～ 7%）です。炭水化物の中で最も多く含まれるのはマルトースとデキストリンです。麦汁にはビタミン、主にグループB、有機酸、ミネラル塩が含まれています。

麦汁は次のように調製される。粉砕した麦芽250 gを1リットルの水道水に注ぎ、48〜50℃に加熱し、この温度で30分間維持し、塊の形成を避けるために混合物を継続的に撹拌します。次の30分で、温度を55〜58℃に上げ、デンプンが完全に糖化するまで、つまり、冷却した混合物とヨウ素との反応が陰性になるまで、このレベルに維持します。このモードでは、タンパク質のアミノ酸やペプチドへの加水分解も発生します。得られた抽出物を紙パルプまたは脱脂綿を通して濾過します。濾液中の糖の濃度は、ボーリング比重計を使用して測定され、その度数 (B) は麦汁中の糖の割合にほぼ対応します。麦汁は水道水で希望の濃度に調整されます。微細な菌類の培養には 3-4B 麦汁が最もよく使用され、酵母には 6-8B、そして最も要求の厳しい乳酸菌には 8-12B 麦汁が使用されます。麦汁は0.5気圧で30分間殺菌されます。

酵母培地は、主に多くの従属栄養微生物の培養に使用されます。酵母培地の基本は酵母水です。調製するには、70～100gの新鮮な圧搾酵母または7～10gの乾燥酵母を1リットルの水で30分間煮沸し、酵母細胞が沈殿した後、液体をデカントするか脱脂綿で濾過します。濾液に水１リットルを加え、再度３０分間煮沸し、再度濾過する。得られた酵母水 100 ml に、1 ～ 2 g の炭水化物と無機塩、最も多くの場合 KHPO (0.1 g) と NaCl (0.5 g) を加えます。培地のpHを6.8〜7.2に調整します。培地は0.5気圧で20〜30分間滅菌されます。

ジャガイモ培地は主に、この属の代表である芽胞形成細菌の培養に使用されます。 カウロバクターおよび他のいくつかの化学有機栄養細菌。この培地を準備するには、よく洗って皮をむいたジャガイモ 200 g を小さなスライスに切り、1 リットルの水道水を加えて 20 ～ 30 分間煮ます。培養液を脱脂綿で濾過し、濾液の量を1リットルに調整し、培養用の容器に注ぎます。培地は 1 気圧で 1 時間、または 1.5 気圧で 30 分間滅菌されます。

土壌抽出物は、主に土壌微生物相のさまざまな代表を培養するために使用されます。それを準備するには、500 gの肥沃な土壌を1.5リットルの水道水に注ぎ、1気圧で30分間オートクレーブ滅菌します。得られた抽出物を濾紙で濾過し、熱い濾液に０．５ｇのＣａＣＯを加え、完全に混合し、５〜７分後に再度濾過する。原則として、1000 mlごとに0.2 gのKHPOが抽出物に添加されます。 1気圧で滅菌します。

合成メディア- これらは、正確に指定された量で摂取された、特定の化学組成の化合物のみを含む培地です。合成培地は、微生物の代謝、生理学、生化学の研究で広く使用されています。微生物の増殖や老廃物の生合成の強化を確実にする合成培地の組成を開発するには、特定の生物の代謝特性とその生物の食物源の必要性を知る必要があります。現在、微生物学者は、組成が不確かな天然培地と品質において劣らない十分な数の合成培地を自由に使用できるようにしています。合成メディアには比較的大規模なコンポーネントが含まれていますが、構成が非常に単純である場合もあります。一部の合成培地のレシピは付録に記載されています。

天然および合成メディアに加えて、いわゆる 半合成メディア。半合成培地の主成分は、炭水化物、アンモニウム塩または硝酸塩、リン酸塩などの既知の化学組成の化合物です。しかし、その組成には、酵母自己消化物、土壌抽出物、カゼイン加水分解物などの不確実な組成の物質が常に含まれています。これらの培地は、アミノ酸、ビタミン、抗生物質、および微生物のその他の重要な老廃物を取得するために産業微生物学で広く使用されています。

酵素、ビタミン、抗生物質などの老廃物の蓄積がすべての場合に平行して起こるわけではないため、微生物の良好な発育を保証する環境は常に他の研究や実際の問題を解決するのに適していることに留意する必要があります。バイオマスの蓄積。

多くの場合、微生物が大量に増殖すると、目的の代謝産物がほとんど形成されないか、形成される量が不十分になります。必要な接続を可能な限り最大限に提供するために、特別なメディアが使用されます。培地の成分の濃度と比率の選択は、実験の数学的計画法を使用して行われます。この方法は、V. N. Maksimov (1980) の本に十分に詳細に記載されています。

選択的な環境微生物を自然の生息地から隔離するように設計されています。それらは主に、共通の生理学的特性を特徴とする特定のグループの微生物の発生を確実にします。について詳しく読むこれらの環境では、p. を参照してください。 108～109。

鑑別診断（指標）環境与える

ある種類の微生物を別の種類の微生物から素早く区別する能力他の人、またはその特徴のいくつかを特定します。天然基質中の大腸菌群から細菌を識別するための指示培地の例は、以下の組成を有するエンド寒天培地である。乳糖-10; KHPO -3.5; NaHsO-2.5; 寒天 - 150; 蒸留水 - 1000 ml; pH7.4。塩基性フクシンの１０％アルコール溶液４ｍｌを培地に添加する。培地を 1 atm で 15 分間滅菌し、暗所に保管します。属の細菌 エシェリヒア属この培地上では、金属光沢のある深紅色のコロニーを形成します。

細菌の種類を決定する場合、ニュートラルレッド (0.0005%)、フェノールレッド (0.005%)、ブロモチモールブルー (0.0005%) のいずれかの指示薬を含む pH 指示薬培地が使用されます。 . 微生物の発生が酸またはアルカリの生成を伴う場合、鑑別診断媒体は衛生および医療微生物学で特に広く使用されています。特定の微生物グループの迅速な同定。

物理的状態に基づいて、液体、粒状、および高密度の媒体が区別されます。

液体媒体これらは、バイオマスや代謝産物の蓄積、微生物の生理機能や生化学の研究、固体培地ではうまく発育しない微生物の培養コレクションの維持や保存に広く使用されています。

バルクメディア主に生理活性化合物の特定の生産者を培養するための産業微生物学や、微生物の培養物を保存するためのコレクションで使用されます。このような培地には、例えば、茹でたキビ、ふすま、栄養溶液に浸したケイ砂が含まれる。

高密度メディア純粋培養の単離、コロニーを説明するための診断目的、微生物の数とその抗生物質活性の測定、コレクションで培養物を保存するため、およびその他の多くの場合に使用されます。寒天またはゼラチンは培地を圧縮するために使用されます。栄養培地を含浸させたケイ酸塩プレートは、緻密なベースとして機能します。

図 41. 試験管内での寒天斜面の調製

寒天は培地を圧縮するために特によく使用されます。スクロースとアガロペクチンを含む複合多糖類です。その上。寒天には、少量の容易に吸収される物質とさまざまな塩が含まれています。寒天は特定の海藻から得られ、板状、茎状、または粉末の形で提供されます。ほとんどの微生物は寒天を増殖の基質として使用しないため、寒天は便利です。水中ではゲルを形成し、約 100℃で溶け、40℃で硬化します。

したがって、現在知られている微生物のかなりの部分は寒天培地で培養することができます。

ほとんどの場合、寒天は 1.5% の量で培地に添加されます。より湿度の高い環境が必要な場合は、寒天を 1.0% 追加し、より高密度で乾燥した環境では 2 ～ 3% の寒天を追加します。寒天培地は完全に溶けるまで沸騰水浴中で加熱されます。試験管内の傾斜寒天培地上で微生物を増殖させる場合、各試験管には培地が 1/3 しか満たされていません。培地の乾燥を防ぐため、滅菌後、播種前に刈り取ります。これを行うには、沸騰水浴中で溶かした培地を入れた試験管を傾斜した位置に置き (図 41)、培地を固化させます。傾斜寒天培地は綿栓まで 4 ～ 6 cm にならないようにしてください。シャーレで細菌を培養するための培地は、傾斜寒天培地よりも容量の多い 20 ～ 25 ml のチューブに注入するか、フラスコで滅菌します。後者の場合、寒天は滅菌前に溶解されません。

寒天培地が冷えると、結露水が発生します。寒天の濃度が低いほど、より多くの水分が放出されます。したがって、シャーレ内の寒天培地の表面で微生物を増殖させる場合、分離されたコロニーを得るために、シャーレは蓋を下にしてサーモスタット内に置かれます。そうしないと、蓋の内側に結露が蓄積し、培地の表面に流れ出て、孤立したコロニーの生成が妨げられます。

寒天は弱アルカリ性であるため、寒天を添加すると pH がわずかに上昇する可能性があります。弱酸性、中性、または弱アルカリ性の環境では、寒天は溶融と凝固を数回繰り返した後、また滅菌を繰り返した後でもゲルを形成する能力を保持します。ただし、培地の pH が 5.5 未満の場合、寒天は滅菌中に部分的に加水分解され、そのためゲルを形成する能力が失われ、硬化しなくなることに注意してください。この場合、一定量の水中で培地とは別に滅菌し、ウォーターバスで溶かし、絶えず撹拌しながら、滅菌済みの予熱した培地に注ぎます。

上で述べたように、寒天には有機物質や無機物質の不純物が含まれており、これらは場合によっては望ましくないものです。それらのほとんどを削除するには、次の手順を実行します。寒天を水道水で満たし、30〜37℃のサーモスタット内に置きます。不純物は水中に洗い流され、水中で繁殖する微生物によって分解されます。 1 ～ 2 日後、液体を排出し、寒天を真水で数回洗浄し、再び水を満たしてサーモスタットに戻します。この水が濁ってきたら、また新しい水と入れ替え、臭いが消えて水が濁らなくなるまで繰り返します。通常、2 ～ 3 週間後には、可溶性有機物質や無機物質がほとんど含まれていない寒天が得られます。水を切り、寒天を二重ガーゼの袋に入れ、水道の流水で2〜3日間洗い、その後薄く広げて風乾または40〜50℃のオーブンで乾燥させます。

ゼラチンは、骨、軟骨、腱、鱗のタンパク質であるコラーゲンが豊富な基質から得られる抽出物であり、ゼラチンによって形成されるゲルは、多くの微生物の通常の培養温度（30℃）よりも低い温度で溶けます。さらに、ゼラチンはタンパク質分解酵素によって液化され、多くの微生物が培地中に放出するため、ゼラチンは主に微生物のタンパク質分解活性を検出するための圧縮剤としての使用が制限されます。、酵母の巨大で深いコロニーを得るために、彼らは肉 - ペプトン、2番目の - 麦汁ゼラチンを使用します。

10 ～ 20% のゼラチンを液体培地に添加し、5 ～ 10 分間放置して膨潤させ、溶解するまで水浴中で加熱します。培地の pH を 6.8 ～ 7.0 に調整します。ゼラチンは酸性で緩衝能力が高いため、中和には MPA などを中和する場合よりも多くのアルカリが使用されます。ゼラチン培地は、０．５気圧で１５分間、またはコッホボイラー中で２０分間×３回に分けて滅菌される。ゼラチンは部分的に加水分解され、ゲル形成特性を失うため、特に培地の pH が 6.0 未満または 7.3 を超える場合、ゼラチン培地を繰り返し滅菌することはお勧めできません。

シリカゲル（シリカゲル）は、厳密に定義された組成の合成媒体の固体ベースとして使用されます。

ゲルは次のように調製される。塩酸濃度へ

1.1 同じ密度の等量の液体ガラス溶液 (NaSiO または KSiO) を撹拌しながら加えます。混合物をペトリ皿にそれぞれ 20 ～ 30 ml 注ぎ、皿を水平面上に数時間放置します。ケイ酸ゲルが形成されます。ゲルが濃くなったら、開いたカップをガラスまたはエナメル容器に置き、流水で 2 ～ 3 日間洗浄して塩化物を除去し、その後熱蒸留水で数回洗浄します。塩化物の存在は、1 ～ 5% 硝酸銀溶液を含む洗浄水の定性サンプルによって判断されます。塩化物の存在下では、白色の沈殿が形成されます。塩素から洗浄したプレートを、２〜３ｍｌの濃縮培地に浸漬する。その成分の含有量は、対応する液体培地よりも５〜１０倍高い。次に、ゲルプレートを備えたカップを開いた状態で乾燥キャビネットに置き、ゲルに亀裂が入らず、表面が湿ったままであることを確認しながら 50 ～ 60 ℃で乾燥させます。必要に応じて、カップを紙で包み、裏返さずに 0.5 気圧のオートクレーブで 15 分間滅菌します。独立栄養細菌の分離および培養を目的としたプレートは滅菌する必要がありません。ゲルを含浸させた媒体のみが滅菌されます。シリカゲルプレートを備えたカップは、使用するまで水中に保管されます。

寒天、ゼラチン、ケイ酸ゲルのいくつかの具体的な特徴を表 3 にまとめます。

表 3. 栄養培地を圧縮するために使用される物質の主な特徴

寒天またはゼラチンを含むすべての培地は、組成が不確かな天然培地として分類されるべきであることを覚えておく必要があります。

メディアの明確化。清澄寒天培地またはゼラチン培地は、たとえば嫌気性微生物のはっきりと目に見える単離コロニーを取得するなど、一部の特殊な研究に必要です。

場合によっては、透明な媒体が沈殿物から脱脂綿を通してろ過することによって得られます。これでも十分でない場合は、卵白を使用して培地を清澄します。ライトニング用 500ml 卵白は1個分あれば十分です。卵白を卵黄から分離し、固体の泡が形成されるまで同量の水とともに振り混ぜます。ホイップしたタンパク質を、あらかじめ溶かして45〜50℃に冷却した培地に注ぎます。タンパク質を添加する前に、pH を確認し、必要に応じて培地を pH 7.0 ～ 7.3 にアルカリ化します。タンパク質を含む培地を完全に混合し、オートクレーブまたはコッホボイラーで100℃で1時間加熱します。タンパク質は媒体中に懸濁したすべての粒子を凝固させて吸着します。凝固したタンパク質が表面に浮き上がったり沈んだりすると、培地は脱脂綿を通して熱い状態で素早く濾過されます。この場合、濾過中に媒体が固化するのを防ぐために、漏斗用に特別に加熱された支持体を使用すると便利です。

タンパク質を添加することが望ましくない合成寒天培地については、次のように明らかにされています。培地をビーカーに注ぎ、オートクレーブにかけ、滅菌後密閉オートクレーブ内で 10 ～ 12 時間、通常は一晩放置します。このようにゆっくりと冷却すると、懸濁粒子はすべて底に沈みます。凍結した寒天培地をガラスから取り出し、上部の透明な部分を切り取り、フラスコに入れて再度滅菌します。

培地の調製や微生物の培養を目的とした皿には異物が含まれていてはなりません。ガラス容器を使用するのが最善です。新しいガラス器具は洗浄され、塩酸または硫酸の 1 ～ 2% 溶液に一晩浸漬され、その後水で数回洗浄され、乾燥されます。微量元素、ビタミン、合成培地、その他の培地を扱う場合は、皿を特に徹底的に洗浄する必要がある場合があります。組成が不確かな天然培地は、エナメル皿で調製できます。

メディアは乾燥して濃縮され、使用できなくなるため、将来の使用のために大量のメディアを準備しないでください。メディアは、光を避け、湿気が多すぎない涼しい場所に保管してください。湿った状態では、綿栓が湿気で飽和し、綿栓を通して微細な真菌の菌糸体が成長する可能性があります。培地の入った各容器には、培地の組成（名前）とその調製時間を示すラベルが付いている必要があります。

微生物培養の基本原理。 微生物の培養

1.細菌培養の基本原理:

微生物の培養のための培地の編集の原則

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