Saat menyiapkan media nutrisi, perlu memperhitungkan kebutuhan mikroorganisme yang dibudidayakan akan berbagai nutrisi. Ada klasifikasi berbeda dari media budaya.
Klasifikasi media nutrisi berdasarkan komposisi:
1. Lingkungan Sederhana(MPB, MPA, gelatin, air pepton). Kaldu pepton daging (MPB) adalah bahan dasar protein untuk semua media.
Ada beberapa cara untuk mempersiapkan MPB:
a) pada air daging dengan penambahan pepton siap pakai;
b) pada pencernaan hasil hidrolisis bahan mentah dengan menggunakan enzim.
Agar pepton daging (MPA) - dibuat dengan menambahkan agar-agar (1,5-3%) ke MPB. Jika MPA didistribusikan secara diagonal melintasi tabung atau botol, maka itu adalah agar-agar miring. Jika media disebarkan secara vertikal dalam tabung reaksi yang tingginya 5-7 cm, maka disebut kolom agar. MPA, dibekukan dalam cawan petri berbentuk pasta - agar piring. Jika media mempunyai lapisan vertikal setinggi 2-3 cm dan lapisan diagonal berukuran sama, media tersebut termasuk agar-agar semi miring.
2. Lingkungan yang kompleks disiapkan secara sederhana dengan bahan tambahan tertentu (karbohidrat, darah, empedu, telur, whey, susu, garam, faktor pertumbuhan, dll.)
Klasifikasi media nutrisi menurut komponen awalnya:
1. Media budaya alami adalah produk alami yang berasal dari hewan atau tumbuhan.
Mungkin:
Sayuran (produk awal - kedelai, kacang polong, kentang, wortel, dll.).
Hewan (produk awal - daging, ikan, telur, susu, jaringan hewan, empedu, serum darah, dll.).
Campuran (MPA, lingkungan Levenshtein-Jensen, dll.).
2. Lingkungan Buatan mengandung produk olahan alami (air daging, pencernaan), zat yang berasal dari produk tersebut (pepton, ragi dan ekstrak jagung) dan berbagai bahan tambahan. Ini adalah kelompok media terbesar dan paling beragam komposisinya. Mereka dibuat menurut resep tertentu dari berbagai infus atau rebusan yang berasal dari hewan atau tumbuhan dengan tambahan garam anorganik, karbohidrat, dan zat nitrogen.
3. Media sintetis(dengan komposisi kimia yang diketahui) terdiri dari senyawa kimia murni dalam konsentrasi yang ditentukan secara tepat (dengan penambahan karbohidrat, garam, asam amino, vitamin, dll.). Berdasarkan media tersebut, dengan menambahkan media alami atau buatan, diperoleh media semi sintetik.
Klasifikasi media nutrisi berdasarkan konsistensi: ada lingkungan cairan(media tanpa agar), setengah cair(dengan agar-agar hingga 1%), padat(agar - 1,5-2,5%). Media cair lebih sering digunakan untuk mempelajari karakteristik fisiologis dan biokimia mikroorganisme serta untuk mengakumulasi biomassa dan produk metabolisme. Media semi cair biasanya digunakan untuk menyimpan kultur, media padat untuk mengisolasi mikroorganisme, mempelajari morfologi koloni, tujuan diagnostik, pencatatan kuantitatif, menentukan sifat antagonis, dll.
Klasifikasi media nutrisi menurut tujuan yang dimaksudkan: universal (umum digunakan) dan khusus.
Lingkungan universal (dasar). Media ini digunakan untuk budidaya sebagian besar mikroorganisme yang relatif bersahaja atau digunakan sebagai dasar untuk pembuatan media khusus, dengan menambahkan darah, gula, susu, whey, dan bahan lain yang diperlukan untuk reproduksi jenis mikroorganisme tertentu. Golongan ini meliputi: MPB - kaldu daging-pepton, MPA - agar daging-pepton, MPG - agar-agar daging-pepton, dll.
Lingkungan khusus. Dirancang untuk isolasi dan budidaya selektif jenis mikroorganisme tertentu yang tidak tumbuh pada media sederhana.
Jenis media khusus berikut ini dibedakan: media pengayaan, media selektif, media diagnostik diferensial, media pengawet, dan media akumulasi.
Media pengayaan. Banyak mikroorganisme yang tidak tumbuh pada media biasa, sehingga karbohidrat (kaldu gula atau agar) atau protein (agar whey dan kaldu, agar darah dan kaldu) ditambahkan untuk meningkatkan nilai gizi media. Agar darah atau kaldu darah diperoleh dengan menambahkan 5-10% darah domba, kelinci, kuda, atau manusia steril yang dipanaskan dan didefibrinasi ke dalam media nutrisi. Media ini digunakan untuk mengisolasi streptokokus, pneumokokus dan bakteri lainnya, serta untuk mempelajari aktivitas hemolitik. Kaldu whey atau agar whey dibuat dengan menambahkan 15-20% serum kuda atau sapi ke media biasa.
2. Lingkungan elektif (selektif). Media ini dirancang untuk mengisolasi dan mengakumulasi mikroorganisme jenis tertentu secara selektif dari bahan yang mengandung beberapa jenis mikroba. Jika benih mengandung campuran berbagai mikroorganisme, pertumbuhan spesies yang medianya akan diseleksi akan muncul terlebih dahulu. Selektivitas lingkungan dicapai dengan menciptakan kondisi yang optimal untuk budidaya mikroba tertentu (pH, Eh, konsentrasi garam, komposisi nutrisi), yaitu. seleksi positif. Atau dengan menambahkan zat ke lingkungan yang menghambat mikroorganisme lain (empedu, NaCl konsentrasi tinggi, antibiotik, dll), yaitu. seleksi negatif. Kelompok ini meliputi:
Lingkungan selenit- Merupakan media pengayaan terbaik untuk mikroba salmonella dan disentri Sonne. Natrium selenit yang terkandung dalam medium merangsang pertumbuhan bakteri ini dan menghambat pertumbuhan flora terkait.
Agar bismut sulfit - mengandung garam bismut, berwarna hijau cemerlang. Salmonella yang tumbuh pada media ini berbentuk koloni berwarna hitam. Jenis bakteri lain tidak tumbuh pada media ini.
Agar garam kuning telur (YSA) - media isolasi stafilokokus mengandung hingga 10% natrium klorida, yang menekan sebagian besar bakteri yang terkandung dalam bahan. Selain itu, media ini juga merupakan diagnostik diferensial, karena keberadaan kuning telur memungkinkan untuk mendeteksi enzim lesitinase (lesitovitellase), yang dibentuk oleh stafilokokus patogen. Lesitinase memecah lesitin menjadi fosfokolin dan asam lemak yang tidak larut dalam air, sehingga lingkungan di sekitar koloni positif lesitinase menjadi keruh dan muncul zona opalescent dalam bentuk “mahkota pelangi”.
Kaldu empedu selektif terhadap salmonella, reproduksinya dirangsang dengan penambahan 10% empedu, sekaligus menghambat pertumbuhan mikroorganisme yang menyertainya.
Agar-agar alkali atau air pepton basa bersifat selektif terhadap Vibrio cholerae, reaksi basa lingkungan (pH 9,0) tidak mencegah pertumbuhan Vibrio cholerae, tetapi menghambat pertumbuhan mikroorganisme lainnya. 3-5 hari. DAN
3. Lingkungan diagnostik diferensial. Media diagnostik diferensial digunakan untuk membedakan satu jenis mikroorganisme dengan jenis mikroorganisme lainnya berdasarkan sifat aktivitas enzimatiknya. Komposisi media ini dipilih sedemikian rupa sehingga dapat mengidentifikasi dengan jelas sifat paling khas dari suatu jenis mikroorganisme tertentu, berdasarkan karakteristik metabolismenya.
Media untuk mengetahui kemampuan proteolitik dan hemolitik mikroba yang mengandung zat protein: darah, susu, agar-agar, dll. Media yang paling umum adalah gelatin pepton daging (MPG), serum kuda beku, susu, dan agar darah (BA).
Media untuk mempelajari sifat glikolitik meliputi tiga komponen utama: basis nutrisi (kaldu, agar), substrat (mono dan disakarida, alkohol polihidrat) dan indikator untuk mengidentifikasi enzim yang sesuai. Pemecahan substrat secara enzimatik menyebabkan perubahan pH dan perubahan warna medium. Yang paling umum adalah media berwarna yang mengandung berbagai karbohidrat (misalnya bromotimol biru, indikator tekanan darah). Media Hiss juga banyak digunakan, yang memperhitungkan perbedaan kemampuan memfermentasi berbagai karbohidrat dengan pembentukan asam, atau asam dan gas.
Untuk membedakan enterobakteri, air pepton digunakan dengan sekumpulan berbagai karbohidrat, indikator Andrede dan pelampung, yang memudahkan deteksi pembentukan gas dan membantu menentukan secara visual perubahan karakteristik pH berbagai mikroorganisme. Secara khusus, pergeseran ke sisi asam menyebabkan media dengan pereaksi Andrede berubah menjadi merah atau kuning bila menggunakan media dengan bromotimol biru, sedangkan bila dibasakan, indikator Andrede dan bromotimol biru tidak mengubah warna media. Misalnya, untuk mengisolasi bakteri patogen dari usus, digunakan media yang memungkinkan untuk membedakan mikroorganisme patogen dari penghuni tetap usus - mikroorganisme pengurai laktosa.
Media tersebut adalah media Endo. Komponen utama media Endo adalah MPA, laktosa dan fuchsin basa, dihilangkan warnanya dengan natrium sulfit. Media nutrisi awal berwarna merah muda muda. Ketika laktosa difermentasi, asetaldehida terbentuk, yang bereaksi dengan sulfit dan, ketika dilepaskan, fuchsin mewarnai koloni menjadi merah cerah. Oleh karena itu, E. coli yang memfermentasi laktosa, bila ditumbuhkan pada media ini, membentuk koloni berwarna merah dengan kilau metalik, sedangkan Salmonella dan Shigella tidak berwarna karena tidak memfermentasi laktosa.
4. Media penyimpanan, di mana pertumbuhan cepat jenis mikroorganisme tertentu terjadi.
5. Media pengawet (transportasi). Dirancang untuk mengawetkan mikroorganisme selama transportasi ke lokasi penelitian. Media ini mengandung zat aditif yang mencegah perkembangbiakan dan kematian mikroba, sehingga membantu menjaga kelangsungan hidupnya. Yang paling banyak digunakan adalah campuran gliserol (medium Teague), campuran buffer fosfat dan media Kari-Blair, Amies (dengan karbon aktif dan tanpa karbon aktif), Stewart dan lain-lain.
Sterilisasi media kultur.
Semua media nutrisi, apa pun tujuannya, dituangkan ke dalam wadah bersih dan disterilkan. Sebagian besar media disterilkan dengan autoklaf, tetapi dalam kondisi berbeda tergantung komposisinya.
1. Media sintetik dan seluruh media agar yang tidak mengandung protein asli dan karbohidrat disterilkan selama 15-20 menit dalam autoklaf pada suhu 115-120°C dan tekanan 1-1,5 atmosfer.
2. Media dengan karbohidrat dan susu (termasuk laktosa), agar-agar bergizi disterilkan dengan uap mengalir pada suhu fraksional 100°C atau dalam autoklaf pada suhu 112°C dan pada tekanan hingga 1 atmosfer.
3. Media yang mengandung zat protein (serum darah, cairan asites) didekontaminasi dengan tindalisasi atau filtrasi.
4. Untuk mensterilkan media kultur yang mengandung protein asli, gunakan filtrasi melalui filter membran Seitz.
Untuk mengontrol sterilitas media setelah sterilisasi, letakkan dalam termostat pada suhu 37°C selama 3-5 hari. Media cair harus tetap jernih, dan tidak ada tanda-tanda pertumbuhan yang muncul pada permukaan atau ketebalan media kultur padat. Selain pengendalian sterilitas, dilakukan pula pengendalian kimiawi terhadap media yang disiapkan, yang terdiri dari penentuan pH, jumlah nitrogen total dan amina serta klorida dalam beberapa sampel setiap seri.
Ada juga pengendalian biologis terhadap media. Dalam hal ini, beberapa sampel media diinokulasi dengan kultur laboratorium dari mikroba yang medianya disiapkan, dan sifat pertumbuhannya dipelajari. Hanya setelah media telah melewati kendali, barulah media tersebut dapat digunakan sesuai tujuannya.
Klasifikasi media kultur:
Alami– terdiri dari produk yang berasal dari hewan atau tumbuhan dan memiliki komposisi kimia yang tidak pasti.
Misalnya: jus sayur dan buah, jaringan hewan, darah, susu, telur, dll. (IPA, MPB). Semi-sintetis
– komposisinya meliputi senyawa yang sifat kimianya diketahui dan zat yang komposisinya tidak diketahui. Contoh : MPB dengan glukosa, medium Endo, medium Sabouraud.– hanya mengandung senyawa kimia murni dalam konsentrasi yang tepat. Digunakan dalam percobaan laboratorium. Misalnya: lingkungan Chapek, Omelyansky, Ushinsky, dll.
Tujuan media budaya
Universal(tujuan umum) - cocok untuk menumbuhkan berbagai jenis mikroorganisme dan digunakan sebagai bahan dasar media nutrisi khusus. Contoh: MPB, MPA, medium Hottinger, GRM, medium tioglikolat.
Spesial digunakan dalam kasus di mana mikroorganisme tidak tumbuh pada media sederhana. Ini termasuk darah, agar serum, kaldu whey, kaldu asites, agar asites dan lain-lain.
1. Lingkungan pilihan- beberapa mikroorganisme tumbuh lebih cepat dan intensif dibandingkan jenis bakteri lainnya. Misalnya, air pepton alkali 1% merupakan media elektif untuk vibrio kolera, media Roux dan Leffler untuk patogen difteri.
2. Selektif - berkat aditif selektif (empedu, cat, antibiotik, dll.), mereka mampu menekan perkembangan beberapa jenis mikroorganisme, tetapi tidak mempengaruhi jenis lainnya. Contoh: Media Müller selektif terhadap bakteri tifoid-paratifoid, agar furazolidone-tween selektif terhadap corynebacteria dan mikrokokus. Penambahan antibiotik pada media membuat media selektif terhadap jamur (misalnya media Sabouraud, dll.).
3. Diagnostik diferensial- sekelompok media yang memungkinkan untuk menentukan sifat biokimia mikroorganisme dan membedakannya. Mereka dibagi menjadi media untuk menentukan sifat proteolitik, peptolitik, sakarolitik, hemolitik, lipolitik, dan pereduksi (media Endo, Levin, Ploskirev, Gissa).
4. Pengawet (transportasi) -
dirancang untuk menjaga kelangsungan hidup mikroorganisme sejak pengumpulannya
biomaterial sebelum kultur untuk diagnostik
Cairan(kaldu) – mempelajari karakteristik fisiologis dan biokimia serta akumulasi biomassa mikroorganisme
Semi cair(1% agar) – penyimpanan kultur dan budidaya anaerob
Padat(3-5% agar) – isolasi kultur murni, akumulasi, pencatatan kuantitatif, studi sifat budaya, hubungan antagonis
Dalam jumlah besar– penyimpanan benih di industri (millet, dedak)
Kering– diproduksi oleh industri untuk persiapan media nutrisi
Sistem transportasi dengan lingkungan Stuart
Media Stewart adalah substrat semi-padat dan miskin nutrisi untuk pelestarian dan pengangkutan berbagai mikroorganisme patogen, seperti Neisseria gonorrhoeae, Haemophilus influenzae, Corynebacterium diphteriae, Trichomonas vaginalis, Streptococcus sp., Salmonella sp., Shigella sp. dll. Mikroorganisme yang paling menuntut bertahan hidup di lingkungan ini selama lebih dari satu hari, yang lain – hingga beberapa hari.
Kehadiran tioglikolat dalam medium menekan aktivitas enzimatik bakteri, dan tidak adanya nitrogen mencegah reproduksi mereka.
Sistem transportasi dengan lingkungan Keri Blair
Media angkut Keri Blair merupakan modifikasi dari media angkut dasar Stewart yang dirancang khusus untuk spesimen tinja.
Gliserofosfat, yang merupakan metabolit dari beberapa enterobakteri ( Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, dll.), digantikan oleh fosfat anorganik,
Metilen biru dihilangkan dan pH medium ditingkatkan menjadi 8,4.
Media Keri Blair memungkinkan pengawetan sebagian besar patogen, termasuk mikroorganisme berbahaya seperti Neisseria sp., Haemophilus sp., Streptococcus sp..
Media ini adalah standar untuk mengangkut anaerob.
Sistem transportasi dengan lingkungan Ames
Media transpor Ames adalah modifikasi lain dari media transpor dasar Stewart, di mana gliserofosfat digantikan oleh fosfat anorganik, karena gliserofosfat adalah metabolit dari beberapa enterobakteri ( Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, dkk.) dan dapat mendukung pertumbuhan beberapa mikroorganisme gram negatif.
Metilen biru telah diganti dengan karbon aktif tingkat farmasi.
Kalsium dan magnesium ditambahkan ke media untuk menjaga permeabilitas sel bakteri.
Lingkungan ini mampu mendukung mikroorganisme seperti Neisseria sp., Haemophilus sp., Corynebacteria, Streptococci, Enterobacteriaceae dll, namun hasil terbaik diperoleh dengan budidaya dalam 24 jam pertama.
Media pengayaan universal: Agar pepton daging (MPA) dan Kaldu pepton daging (MPB)
Mereka adalah media utama untuk menginokulasi mikroorganisme untuk memeriksa kemurnian kultur sebelum dilakukan biokimia dan serotipe.
Mereka digunakan untuk membudidayakan dan menghitung mikroorganisme sederhana. Dalam bentuk semi cair, media dapat digunakan untuk menyimpan mikroorganisme kontrol (referensi).
Lingkungan penyimpanan universal Lingkungan Hottinger
Dirancang untuk budidaya berbagai mikroorganisme, seperti enterobacteria, Pseudomonas aeruginosa, stafilokokus, dan beberapa jenis streptokokus. Jika perlu, bisa diperkaya dengan karbohidrat dan garam.
Mengandung hidrolisat Hottinger yang diperoleh melalui hidrolisis enzimatik daging cincang (sapi) dengan pankreatin, dilanjutkan dengan penyaringan dan penambahan kloroform sebagai pengawet.
Lingkungan penyimpanan universal:Lingkungan Mueller-Hinton
Media ini digunakan untuk budidaya Neisseria sp. dan untuk menentukan sensitivitas mikroorganisme terhadap agen antimikroba.
Rabu McConkey
Media MacConkey direkomendasikan sebagai media diferensial untuk isolasi selektif enterobakteri dan basil gram negatif terkait.
Strain positif laktosa tumbuh dengan koloni berwarna merah muda atau merah yang mungkin dikelilingi oleh zona pengendapan garam empedu.
Warna merah muncul sebagai akibat pengasaman medium oleh produk penguraian laktosa (bila pH turun di bawah 6,8) dan adsorpsi warna merah netral.
Strain yang tidak memfermentasi laktosa (Shigella, Salmonella) biasanya membentuk koloni transparan, tidak berwarna dan tidak mengubah lingkungan.
Lingkungan diagnostik diferensial:Lingkungan Endo
Media ini dikembangkan oleh Endo sebagai media kultur untuk diferensiasi mikroorganisme fermentasi laktosa dan non-fermentasi. Ini digunakan untuk pemeriksaan mikrobiologi air, air limbah, susu dan produk makanan lainnya.
Natrium sulfit dan fuchsin basa memiliki efek penghambatan pada mikroorganisme gram positif. Laktosa diurai oleh mikroorganisme menjadi aldehida dan asam.
Lingkungan diagnostik diferensial:Aldehida, pada gilirannya, melepaskan fuchsin dari kompleks fuchsin-sulfit, meningkatkan warna merah koloni.
Pada E. coli, reaksi ini sangat terasa dan disertai dengan kristalisasi fuchsin, yang dimanifestasikan oleh kilau logam kehijauan (muchsin gloss) pada koloni.
Agar garam kuning telur
Media ini digunakan sebagai media selektif untuk mengisolasi kultur stafilokokus yang signifikan secara klinis.
Lingkungan diagnostik diferensial:Mannitol adalah substrat yang dapat difermentasi dan berdiferensiasi serta sumber karbon.
Penambahan (hingga 5% v/v) emulsi kuning telur memungkinkan untuk menentukan aktivitas lipase mikroorganisme. Emulsi dalam lingkungan garam menjadi transparan, oleh karena itu, dengan adanya aktivitas lipase, terbentuk zona buram kuning di sekitar koloni.
Wilson-Blair atau Agar Bismuth Sulfit
Warna hijau cemerlang menghambat pertumbuhan semua bakteri gram positif. Glukosa adalah karbohidrat yang dapat difermentasi.
Ferrous sulfate dapat mendeteksi produksi hidrogen sulfida.
Bismut adalah logam berat yang menghambat pertumbuhan sebagian besar bakteri usus gram negatif kecuali Salmonella.
Salmonella mereduksi besi sulfat dengan adanya glukosa dan bismut sulfit menjadi besi sulfida, yang mengubah koloninya menjadi hitam.Lingkungan pilihan khusus:
Lingkungan Loeffler Media dengan tambahan serum kuda ini digunakan untuk budidaya Corynebacterium diphtheriae
dari bahan klinis dan subkultur kultur murni mikroorganisme ini.
Konsentrasi serum yang tinggi membantu menentukan aktivitas proteolitik mikroorganisme, serta pembentukan pigmen.Pepton dan ekstrak daging memberi mikroorganisme nutrisi penting. Glukosa adalah substrat yang dapat difermentasi dan sumber energi.
Media selektif khusus:
Kampilobakagar Media selektif terhadap Campylobacter yang terdiri dari basa agar darah dengan darah domba atau darah kuda dan antibiotik..
Komponen antimikroba secara signifikan menghambat pertumbuhan mikroflora normal, mendorong pertumbuhan dan ekskresi melalui feses
Campylobacter janin ssp. jejuni Kehadiran amfoterisin B dalam suplemen secara signifikan atau sepenuhnya menekan pertumbuhan jamur; sefalotin yang diperkenalkan kemudian meningkatkan penekanan mikroflora usus normal. Koloni
Campylobacter janin ssp. jejuni
bersifat berlendir, berwarna abu-abu pipih dengan garis tidak beraturan atau menonjol, bulat, tanpa hemolisis.
Beberapa strain mungkin menghasilkan koloni berwarna kuning kecoklatan atau merah muda.
Paling sering, produk pemecahan sebagian protein - pepton atau berbagai infus dan ekstrak daging - digunakan sebagai komponen organik media nutrisi. Komponen-komponen ini digunakan dalam pembuatan banyak media nutrisi konvensional, paling sering digunakan untuk menumbuhkan kultur mikroba, dan juga menjadi dasar media nutrisi yang lebih kompleks. Media kultur yang umum termasuk kaldu pepton daging dan kaldu Hottinger. Tergantung pada jenis mikroorganisme yang dikultur, media kultur umum mengandung suplemen berbagai faktor pertumbuhan bakteri. Dalam beberapa kasus, ini bisa berupa vitamin murni dan asam amino, di kasus lain - ekstrak berbagai substrat alami. Misalnya, bahan tambahan pencernaan jaringan hati digunakan untuk menumbuhkan patogen, dan patogen batuk rejan dibudidayakan pada media yang mengandung darah.
Media nutrisi khusus mencakup media yang digunakan ketika diperlukan untuk mengidentifikasi secara selektif segala jenis mikroorganisme atau sifat biokimia atau fisiologis individualnya dalam bahan yang diteliti. Media nutrisi khusus antara lain sebagai berikut.
1. Lingkungan pilihan, atau selektif, dan pengayaan. Dalam lingkungan seperti itu, kondisi yang menguntungkan tercipta untuk perkembangan salah satu jenis mikroorganisme, sementara semua jenis mikroba lainnya terhambat. Untuk melakukan hal ini, nutrisi ditambahkan ke media yang hanya dapat digunakan oleh mikroba yang diteliti, atau berbagai faktor penghambat yang tidak sensitif terhadap mikroba tersebut. Media kultur jenis ini digunakan untuk mengisolasi dan mengetahui sifat mikroorganisme yang terdapat pada bahan yang diteliti dalam jumlah yang sangat kecil dibandingkan dengan bentuk lainnya. Contoh media selektif adalah media yang mengandung empedu atau garam empedu dan warna hijau cemerlang, serta media yang mengandung selenit yang digunakan untuk mengisolasi bakteri patogen usus. Media ini menekan E. coli. Untuk kultur primer patogen difteri, serum kuda yang terkoagulasi digunakan, di mana semua jenis mikroba lainnya tumbuh jauh lebih lambat.
2. Lingkungan diagnostik diferensial. Media kultur ini digunakan untuk mengidentifikasi kultur bakteri. Penggunaan media nutrisi diagnostik diferensial didasarkan pada kenyataan bahwa ketika bakteri tumbuh di dalamnya, terjadi perubahan kimia pada komponen media, yang dapat dengan mudah diamati. Sebagai komponen variabel media nutrisi diagnostik diferensial, berbagai zat protein, gula, dan zat poliatomik paling sering digunakan, sebagai akibat dari pemecahannya oleh mikroba, reaksi media berubah, yang diperhitungkan oleh perubahan warna. indikator yang ditambahkan ke media, munculnya gelembung gas, dll. Contoh media nutrisi diagnostik diferensial yang banyak digunakan adalah media yang disebut seri beraneka ragam, yang digunakan untuk menentukan kemampuan mikroba untuk memfermentasi berbagai gula (media Hiss, dll.). Lihat juga Lingkungan diagnostik diferensial.
Media nutrisi adalah dasar penelitian bakteriologis. Mereka berfungsi untuk mengisolasi kultur murni mikroba dari bahan yang diteliti dan untuk mempelajari sifat-sifatnya. Media nutrisi menciptakan kondisi optimal untuk perkembangbiakan mikroorganisme. Media harus mengandung zat yang diperlukan untuk pembangunan semua komponen sitoplasma, yaitu. semua sumber pertumbuhan organisme hidup. Ini terutama mencakup sumber nitrogen, karbon, hidrogen dan oksigen.
Sumber hidrogen dan oksigen dalam media nutrisi adalah air. Sumber nitrogen adalah senyawa organik yang diperoleh dari daging, ikan, plasenta, susu, telur, dan darah. Sebagai hasil hidrolisis dengan pankreatin atau trypsin, produk ini menghasilkan apa yang disebut. hidrolisat yang mengandung sejumlah besar asam amino dan pepton, yang diserap dengan baik oleh sebagian besar mikroorganisme. Protein asli hanya dicerna oleh beberapa mikroorganisme yang memiliki eksoprotease. Hidrolisat adalah dasar untuk menyiapkan media bagi banyak mikroorganisme.
Sumber karbon bagi mikroba patogen terutama adalah berbagai karbohidrat: mono dan disakarida, alkohol polihidrat, asam organik dan garamnya.
Selain organogen, bakteri memerlukan senyawa anorganik yang mengandung fosfor, kalium, belerang, natrium, magnesium, besi, serta unsur mikro: kobalt, yodium, mangan, boron, seng, molibdenum, tembaga, dll.
Kebutuhan mikroorganisme akan senyawa anorganik dipenuhi dengan menambahkan garam KH2PO4 K2HPO4 dan lain-lain ke dalam media nutrisi. Unsur mikro yang berperan sebagai katalis proses kimia dibutuhkan dalam jumlah yang dapat diabaikan dan masuk ke media nutrisi dengan pepton, garam anorganik dan air. Selain unsur-unsur organik yang tercantum, banyak mikroorganisme yang memerlukan faktor pertumbuhan, yaitu. dalam zat yang tidak dapat disintesis sendiri. Faktor pertumbuhan harus ditambahkan ke media nutrisi dalam bentuk jadi. Faktor pertumbuhan meliputi berbagai vitamin, yang sumbernya dalam media nutrisi adalah produk asal tumbuhan dan hewan yang ditambahkan ke media nutrisi, mengandung nikotinat, pantotenat, asam parabenzoat, vitamin A, B, C, dll.
Nutrisi dapat diserap oleh mikroba hanya pada reaksi lingkungan tertentu, karena permeabilitas membran sel mikroba berubah tergantung pada pH lingkungan.
Persyaratan media nutrisi.
1. Media kultur harus mengandung nutrisi yang diperlukan untuk memberi makan mikroba.
2. Memiliki pH reaksi yang optimal untuk jenis mikroba yang ditumbuhkan. -
3. Media nutrisi harus mempunyai kadar air dan kekentalan yang cukup, karena mikroba makan sesuai dengan hukum difusi dan osmosis.
4. Bersifat isotonik dan mempunyai potensi redoks tertentu (rH2).
5. Media kultur harus steril, sehingga menjamin kemungkinan tumbuhnya kultur murni.
Kebutuhan unsur hara dan kondisi fisik berbagai jenis mikroba tidak sama, sehingga meniadakan kemungkinan terciptanya media nutrisi universal.
Berdasarkan konsistensinya, media nutrisi dibedakan menjadi padat dan cair. Yang padat dibuat berdasarkan yang cair dengan menambahkan zat perekat ke dalamnya: agar-agar atau agar-agar! Agar-agar (jeli dalam bahasa Melayu) adalah produk asal tumbuhan yang diekstraksi dari rumput laut. Agar-agar larut dalam air pada suhu 80-86°C, mengeras pada suhu 36-40, dan oleh karena itu digunakan untuk memadatkan media nutrisi untuk menumbuhkan berbagai kelompok mikroorganisme pada suhu optimal.
Media nutrisi diklasifikasikan menurut komposisi dan tujuannya.
1.Berdasarkan komposisinya, media nutrisi dibedakan menjadi sederhana dan kompleks
Ada sekelompok lingkungan tujuan umum - sederhana. Golongan ini meliputi kaldu pepton daging (simple nutrisi kaldu), agar daging-pepton (simple nutrisi agar), agar-agar nutrisi. Media ini digunakan untuk menumbuhkan banyak mikroba patogen. Media serba guna, atau media nutrisi sederhana, biasanya dibuat dari hidrolisat dengan penambahan pepton dan natrium klorida. Mereka juga digunakan sebagai dasar untuk menyiapkan media yang kompleks.
2. Kelompok kedua mencakup lingkungan diagnostik elektif, khusus dan diferensial.
Lingkungan pilihan (selektif, selektif, akumulasi, pengayaan). Prinsip pembuatan media nutrisi selektif didasarkan pada pemenuhan kebutuhan biokimia dasar dan energi dari jenis mikroba yang akan dibudidayakan, atau pada penambahan inhibitor yang menekan pertumbuhan mikroflora yang menyertainya. Komposisi dan konsentrasi nutrisi, unsur mikro, faktor pertumbuhan tertentu pada nilai pH yang ditentukan secara ketat atau penambahan inhibitor memberikan kondisi optimal untuk budidaya satu atau beberapa jenis mikroorganisme. Jika bahan benih mengandung campuran berbagai mikroba, pertumbuhan spesies yang lingkungannya selektif akan menjadi yang pertama layu. Contoh media elektif adalah kaldu kuning telur, kaldu selenit, media Ploskirev - untuk menumbuhkan mikroba dari keluarga usus, air pepton alkali - untuk Vibrio cholerae.
Kaldu kuning telur. 10-20% empedu sapi ditambahkan ke MPB. Empedu menghambat pertumbuhan kokus dan flora udara, namun menguntungkan bagi perkembangbiakan salmonella.
Kaldu selenit. Terdiri dari kaldu fosfat dengan penambahan garam natrium selenit, yang merupakan penghambat pertumbuhan flora kokus dan Escherichia coli, tetapi tidak menghambat pertumbuhan salmonella.
Rabu Ploskireva. Media padat yang mengandung penghambat E. coli, coli, tetapi cocok untuk pertumbuhan Shigella dan Salmonella, yang reproduksinya tidak dihambat oleh warna hijau cemerlang dan garam empedu.
Air peton. Mengandung 1% pepton dan 0,5% natrium klorida. Lingkungan selektif untuk klorin vibrio, karena mereka berkembang biak lebih baik dibandingkan bakteri lain di “lingkungan lapar”, terutama dengan reaksi basa, karena mereka sendiri mengeluarkan produk limbah yang bersifat asam.
Lingkungan khusus. Diperlukan untuk membudidayakan bakteri yang tidak tumbuh pada media nutrisi sederhana. Untuk beberapa organisme, perlu menambahkan karbohidrat, darah, dan nutrisi tambahan lainnya ke media nutrisi sederhana. Contoh media nutrisi sederhana adalah kaldu gula dan agar gula untuk streptokokus (masing-masing dibuat dari MPB dan MPA, yang ditambahkan glukosa 0,5-2%).
Untuk pneumokokus dan meningokokus, media khusus adalah kaldu whey dan agar whey (untuk menyiapkan kaldu whey, campurkan 1 bagian MPB dengan 2 bagian serum segar; untuk mendapatkan whey agar, ditambahkan 10-25% serum kuda atau sapi steril ke dalamnya. MPA cair).
Media diagnostik diferensial digunakan untuk menentukan spesies mikroba yang diteliti, berdasarkan karakteristik metabolismenya.” Menurut tujuannya, lingkungan diagnostik diferensial dibagi sebagai berikut:
1. Media untuk mengidentifikasi kemampuan proteolitik mikroba, mengandung susu, gelatin, darah, dll.
2. Media dengan karbohidrat dan alkohol polihidrat untuk
deteksi berbagai enzim sakarolitik.
Indikator ditambahkan ke komposisi media diagnostik diferensial yang dirancang untuk mengidentifikasi sifat sakarolitik dan enzim redoks: merah netral, asam fuchsin, biru bromotimol, biru berair dengan asam merah muda (BP). Dengan mengubah warnanya pada nilai pH yang berbeda, indikator menunjukkan adanya enzim dan pemecahan bahan yang dimasukkan ke dalam medium.
Contoh lingkungan diagnostik diferensial:
Lingkungan Endo. Terdiri dari MPA dengan penambahan 1% laktosa dan basa fuchsin yang didekolorisasi dengan natrium sulfit (indikator). Medium endo memiliki warna agak merah muda. Digunakan dalam diagnosis infeksi usus untuk membedakan bakteri yang menguraikan laktosa menjadi produk asam dari bakteri yang tidak memiliki kemampuan ini. Koloni mikroba positif laktosa (Escherichia coli) berwarna merah akibat reduksi fuchsin. Koloni mikroorganisme negatif laktosa - salmonella, shigella, dll. - tidak berwarna.
Lingkungan diagnostik diferensial mencakup rangkaian beraneka ragam pendek dan panjang. Terdiri dari media dengan karbohidrat (media Hiss), MPB, susu, dan gelatin daging-pepton.
Media hiss dibuat berdasarkan air pepton, yang ditambahkan mono-, di- atau polisakarida murni secara kimia (glukosa, laktosa, pati, dll.).
Untuk mendeteksi perubahan pH akibat pembentukan asam dan penguraian karbohidrat, ditambahkan indikator pada media. Dengan pemecahan karbohidrat yang lebih dalam, produk gas (CO2, CH4, dll.) terbentuk, yang ditangkap menggunakan pelampung - tabung reaksi kecil yang diturunkan terbalik ke dalam medium. Media yang mengandung karbohidrat juga dapat dibuat sebagai media padat dengan penambahan agar-agar 0,5-1%. Kemudian pembentukan gas dideteksi dengan terbentuknya gelembung-gelembung (pecahan) pada kolom medium.
Pada MPB, yang merupakan bagian dari rangkaian beraneka ragam, ditemukan produk yang terbentuk selama pemecahan asam amino dan pepton (indole, hidrogen sulfida). Hidrogen sulfida dideteksi dengan menempatkan selembar kertas saring yang direndam dalam larutan timbal asetat ke dalam MPB setelah kultur disemai. Ketika asam amino yang mengandung belerang dipecah, hidrogen sulfida dilepaskan, dan kertas menjadi hitam karena pembentukan timbal sulfida. Indikator kompleks dapat digunakan untuk menentukan indole. Indole dibentuk oleh pemecahan triptofan dan dapat dideteksi ketika indikator ini ditambahkan ke kultur yang ditanam di MPB. Dengan adanya indole, MPB berubah menjadi hijau atau biru.
Lingkungan kering.
Agar nutrisi, serta media diagnostik diferensial utama, saat ini diproduksi dalam bentuk sediaan kering yang mengandung semua komponen yang diperlukan. Untuk bubuk seperti itu Anda hanya perlu menambahkan air dan merebusnya, lalu, setelah dituang, sterilkan.
