Besleyici ortamlar hazırlanırken, kültüre alınan mikroorganizmaların çeşitli besin maddelerine olan ihtiyacının dikkate alınması gerekir. Kültür medyasının farklı sınıflandırmaları vardır.
Besin ortamlarının bileşime göre sınıflandırılması:
1. Basit ortamlar(MPB, MPA, jelatin, peptonlu su). Et-pepton suyu (MPB), tüm ortamların protein temelidir.
MPB'yi hazırlamanın birkaç yolu vardır:
a) hazır pepton ilavesiyle et suyunda;
b) hammaddelerin hidroliz ürünlerinin enzimler kullanılarak sindirimi üzerine.
Et pepton agar (MPA) - MPB'ye agar-agar (%1,5-3) eklenerek hazırlanır. MPA bir tüp veya şişe boyunca çapraz olarak dağılmışsa eğimli agardır. Besiyeri 5-7 cm yüksekliğinde bir test tüpüne dikey olarak dağıtılırsa agar kolonudur. MPA, Petri kaplarında macun plakalı agar şeklinde dondurulur. Ortamın 2-3 cm yüksekliğinde dikey bir katmanı ve aynı boyutta çapraz bir katmanı varsa yarı eğimli agardır.
2. Karmaşık ortamlar belirli katkı maddeleri (karbonhidratlar, kan, safra, yumurta, peynir altı suyu, süt, tuzlar, büyüme faktörleri vb.) ile basit bir şekilde hazırlanır.
Besin ortamlarının başlangıç bileşenlerine göre sınıflandırılması:
1. Doğal kültür medyası hayvan veya bitki kökenli doğal bir üründür.
Olabilir:
Sebze (ilk ürünler - soya fasulyesi, bezelye, patates, havuç vb.).
Hayvanlar (ilk ürünler - et, balık, yumurta, süt, hayvan dokusu, safra, kan serumu vb.).
Karışık (MPA, Levenshtein-Jensen ortamı vb.).
2. Yapılı Ortamlar işlenmiş doğal ürünler (et suyu, sindirim), bu ürünlerden elde edilen maddeler (pepton, maya ve mısır ekstraktları) ve çeşitli katkı maddeleri içerir. Bu, kompozisyon açısından en büyük ve en çeşitli medya grubudur. İnorganik tuzlar, karbonhidratlar ve azotlu maddelerin eklenmesiyle çeşitli hayvan veya bitki kökenli infüzyonlardan veya kaynatmalardan belirli tariflere göre hazırlanırlar.
3. Sentetik medya(bilinen kimyasal bileşime sahip) kesin olarak belirlenmiş konsantrasyonlarda (karbonhidratlar, tuzlar, amino asitler, vitaminler vb. ilavesiyle) kimyasal olarak saf bileşiklerden oluşur. Bu ortamlara doğal veya yapay ortamlar eklenerek yarı sentetik ortamlar elde edilir.
Besin ortamlarının tutarlılığa göre sınıflandırılması: ortamlar var sıvı(agar içermeyen ortam), Yarı sıvı(%1'e kadar agar ile), yoğun(agar -% 1,5-2,5). Sıvı ortamlar daha çok mikroorganizmaların fizyolojik ve biyokimyasal özelliklerini incelemek ve biyokütle ve metabolik ürünleri biriktirmek için kullanılır. Yarı sıvı ortamlar genellikle kültürleri depolamak, mikroorganizmaları izole etmek için katı ortamlar, kolonilerin morfolojisini incelemek, teşhis amaçlı, kantitatif kayıt, antagonistik özellikleri belirlemek vb. için kullanılır.
Besleyici ortamların amaçlanan amaca göre sınıflandırılması: evrensel (yaygın olarak kullanılır) ve özel.
Evrensel (temel) ortamlar. Bu ortamlar, nispeten iddiasız mikroorganizmaların çoğunun yetiştirilmesi için kullanılır veya belirli bir mikroorganizma türünün çoğaltılması için gerekli olan kan, şeker, süt, peynir altı suyu ve diğer bileşenlerin eklenmesiyle özel ortamların hazırlanmasında temel olarak kullanılır. Bu grup şunları içerir: MPB - et-pepton suyu, MPA - et-pepton agar, MPG - et-pepton jelatin vb.
Özel ortamlar. Basit besiyerinde üremeyen belirli mikroorganizma türlerinin izolasyonu ve seçici kültivasyonu için tasarlanmıştır.
Aşağıdaki özel ortam türleri ayırt edilir: zenginleştirme ortamı, seçici ortam, ayırıcı tanı ortamı, koruyucu ortam ve birikim ortamı.
Zenginleştirme ortamı.Çoğu mikroorganizma normal besiyerinde çoğalmaz, bu nedenle besiyerinin besin değerini arttırmak için karbonhidratlar (şeker suyu veya agar) veya proteinler (peynir altı suyu agarı ve et suyu, kanlı agar ve et suyu) eklenir. Kan agarı veya kan suyu, bir koyun, tavşan, at veya insanın %5-10 ısıtılmış steril defibrine kanının besin ortamına eklenmesiyle elde edilir. Ortam streptokok, pnömokok ve diğer bakterileri izole etmek ve hemolitik aktiviteyi incelemek için kullanılır. Peynir altı suyu suyu veya peynir altı suyu agarı, düz besiyerine %15-20 oranında at veya sığır serumu eklenerek hazırlanır.
2. Seçmeli (seçici) ortamlar. Bu ortamlar, belirli bir türdeki mikroorganizmaları, çeşitli mikrop türlerini içeren bir malzemeden seçici olarak izole etmek ve biriktirmek için tasarlanmıştır. Üzerine çeşitli mikroorganizmaların karışımını içeren materyal ekildiğinde, ilk önce bu ortamın seçici olacağı türlerin büyümesi ortaya çıkacaktır. Çevrenin seçiciliği, belirli mikropların (pH, Eh, tuz konsantrasyonu, besin bileşimi) yetiştirilmesi için en uygun koşulların yaratılmasıyla sağlanır; pozitif seçim. Veya çevreye diğer mikroorganizmaları engelleyen maddeler (safra, yüksek konsantrasyonda NaCl, antibiyotikler vb.) ekleyerek, yani. Negatif seçim. Bu grup şunları içerir:
Selenit ortamı- Salmonella ve dizanteri mikropları Sonne için en iyi zenginleştirme ortamıdır. Ortamda bulunan sodyum selenit bu bakterilerin büyümesini uyarır ve ilgili floranın büyümesini engeller.
Bizmut sülfit agar - bizmut tuzları içerir, parlak yeşildir. Salmonella bu besiyerinde siyah koloniler halinde gelişir. Diğer bakteri türleri bu besiyerinde çoğalmaz.
Sarısı tuzlu agar (YSA) - stafilokokları izole etmeye yönelik ortam, malzemede bulunan bakterilerin çoğunu baskılayan %10'a kadar sodyum klorür içerir. Ek olarak, bu ortam aynı zamanda ayırıcı tanı amaçlıdır, çünkü yumurta sarısının varlığı, patojenik stafilokokların oluşturduğu lesitinaz (lesitovitellaz) enziminin tespit edilmesini mümkün kılar. Lesitinaz, lesitini fosfokolinlere ve suda çözünmeyen yağ asitlerine parçalar, böylece lesitinaz pozitif kolonilerin etrafındaki ortam bulanıklaşır ve "gökkuşağı tacı" şeklinde yanardöner bir bölge ortaya çıkar.
Safra suyu%10 safra ilavesiyle üremesi uyarılan ve aynı zamanda eşlik eden mikroorganizmaların büyümesini engelleyen salmonella için seçicidir.
Alkali agar veya alkali pepton suyu Vibrio cholerae için seçicidir, ortamın alkali reaksiyonu (pH 9,0) Vibrio cholerae'nin büyümesini engellemez ancak diğer mikroorganizmaların büyümesini engeller. 3-5 gün. VE
3. Ayırıcı tanı ortamları. Ayırıcı tanı ortamları, enzimatik aktivitelerinin doğasına bağlı olarak bir tür mikroorganizmayı diğerinden ayırmak için kullanılır. Bu ortamların bileşimi, metabolizmasının özelliklerine bağlı olarak belirli bir mikroorganizma türünün en karakteristik özelliklerini açıkça tanımlayacak şekilde seçilir.
Protein maddeleri içeren mikropların proteolitik ve hemolitik yeteneklerini tanımlamak için ortam: kan, süt, jelatin vb. En yaygın ortamlar et pepton jelatini (MPG), pıhtılaşmış at serumu, süt ve kanlı agardır (BA).
Glikolitik özelliklerin incelenmesine yönelik ortamlar üç ana bileşeni içerir: bir besin bazı (et suyu, agar), bir substrat (mono ve disakkaritler, polihidrik alkoller) ve karşılık gelen enzimleri tanımlamak için bir gösterge. Substratların enzimatik parçalanması pH değişimine ve ortamın renginde değişikliğe yol açar. En yaygın olanı, çeşitli karbonhidratlar içeren renkli ortamlardır (örneğin, bir KB göstergesi olan bromotimol mavisi). Ayrıca, çeşitli karbonhidratları asit veya asit ve gaz oluşumuyla fermente etme yeteneğindeki farklılıkları dikkate alan Hiss ortamları da yaygın olarak kullanılmaktadır.
Enterobakterileri ayırt etmek için, gaz oluşumunun tespitini kolaylaştıran ve çeşitli mikroorganizmaların pH karakteristiğindeki değişimin görsel olarak belirlenmesine yardımcı olan bir dizi çeşitli karbonhidrat, Andrede göstergesi ve şamandıralarla birlikte pepton suyu kullanılır. Özellikle asidik tarafa bir kayma, bromotimol mavisi içeren bir ortam kullanıldığında Andrede reaktifi içeren ortamın kırmızıya veya sarıya dönmesine neden olurken, alkalize edildiğinde Andrede göstergesi ve bromotimol mavisi ortamın rengini değiştirmez. Örneğin, patojenik bakterileri bağırsaktan izole etmek için, patojenik mikroorganizmaları bağırsağın kalıcı sakinlerinden - laktozu parçalayan mikroorganizmalardan ayırmayı mümkün kılan ortamlar kullanılır.
Böyle bir ortam Endo ortamıdır. Endo ortamının ana bileşenleri, sodyum sülfit ile rengi giderilmiş MPA, laktoz ve bazik fuksindir. Başlangıç besin ortamı açık pembe renklidir. Laktoz fermente edildiğinde, sülfit ile reaksiyona giren asetaldehit oluşur ve serbest bırakıldığında fuksin kolonileri parlak kırmızıya boyar. Dolayısıyla laktozu fermente eden E. coli bu besiyerinde büyüdüğünde metalik parlaklığa sahip kırmızı koloniler oluştururken, Salmonella ve Shigella laktozu fermente etmediği için renksizdir.
4. Depolama ortamı, belirli mikroorganizma türlerinin hızlı büyümesinin meydana geldiği.
5. Koruyucu (taşıma) ortam. Araştırma alanına nakliye sırasında mikroorganizmaları korumak için tasarlanmıştır. Bu besiyerleri mikropların çoğalmasını ve ölümünü önleyen, canlılıklarının korunmasına yardımcı olan katkı maddeleri içerir. En yaygın olarak kullanılanlar, gliserol karışımı (Teague ortamı), fosfat-tampon karışımı ve Kari-Blair, Amies (aktif karbonlu ve aktif karbonsuz), Stewart ve diğerlerinin ortamlarıdır.
Kültür ortamının sterilizasyonu.
Tüm besin ortamları, amacına bakılmaksızın temiz kaplara dökülür ve sterilize edilir. Çoğu ortam otoklavlama yoluyla sterilize edilir, ancak bileşimlerine bağlı olarak farklı koşullar altında.
1. Sentetik ortamlar ve doğal protein ve karbonhidrat içermeyen tüm agar ortamları, 115-120°C sıcaklıkta ve 1-1,5 atmosfer basınçta otoklavda 15-20 dakika süreyle sterilize edilir.
2. Karbonhidratlar ve süt (laktoz dahil), besleyici jelatin içeren ortamlar, 100°C'lik bir sıcaklıkta akan buharla fraksiyonel olarak veya bir otoklavda 112°C'de ve 1 atmosfere kadar bir basınçta sterilize edilir.
3. Protein maddeleri içeren ortamlar (kan serumu, asit sıvısı) tindalizasyon veya filtreleme yoluyla dekontamine edilir.
4. Doğal proteinler içeren kültür ortamını sterilize etmek için Seitz membran filtreleri aracılığıyla filtrelemeyi kullanın.
Sterilizasyondan sonra besiyerinin sterilitesini kontrol etmek için 3-5 gün boyunca 37°C'deki bir termostata yerleştirin. Sıvı besiyeri temiz kalmalı ve katı kültür besiyerinin yüzeyinde veya kalınlığında hiçbir büyüme belirtisi görünmemelidir. Sterilite kontrolüne ek olarak, her seriden birkaç numunede pH'ın, toplam miktarın ve amin nitrojen ve klorürlerin belirlenmesinden oluşan hazırlanan ortamın kimyasal kontrolü gerçekleştirilir.
Medyanın biyolojik kontrolü de vardır. Bu durumda, besiyerinin birkaç numunesi, besiyerinin hazırlandığı mikropun laboratuvar kültürü ile aşılanır ve büyümesinin doğası incelenir. Medya ancak kontrolü geçtikten sonra amacına uygun olarak kullanılabilir.
Kültür ortamlarının sınıflandırılması:
Doğal- Hayvan veya bitki kökenli ürünlerden oluşan ve kimyasal bileşimi belirsiz olan. Örneğin: sebze ve meyve suları, hayvan dokuları, kan, süt, yumurta vb. (IPA, MPB).
Yarı sentetik- Bileşim, kimyasal yapısı bilinen bileşikleri ve bileşimi bilinmeyen maddeleri içerir. Örneğin: glikozlu MPB, Endo ortamı, Sabouraud ortamı.
Sentetik– yalnızca kesin konsantrasyonlarda kimyasal olarak saf bileşikler içerir. Laboratuvar deneylerinde kullanılır. Örneğin: Chapek, Omelyansky, Ushinsky vb. ortamı.
Kültür medyasının amacı
Evrensel(genel amaçlı) - birçok mikroorganizma türünün yetiştirilmesi için uygundur ve özel besin ortamları için temel olarak kullanılır. Örnekler: MPB, MPA, Hottinger ortamı, GRM, tiyoglikolat ortamı.
Özel Mikroorganizmaların basit besiyerinde çoğalmadığı durumlarda kullanılır. Bunlara kan, serum agar, peynir altı suyu suyu, asitli et suyu, asitli agar ve diğerleri dahildir.
1. Seçmeli ortamlar- bazı mikroorganizmalar diğer bakteri türlerine göre daha hızlı ve daha yoğun şekilde çoğalırlar. Örneğin, %1 alkalin peptonlu su, kolera vibriosları için seçici bir ortamdır; difteri patojenleri için ise Roux ve Leffler ortamıdır.
2. Seçici - Seçici katkı maddeleri (safra, boyalar, antibiyotikler vb.) sayesinde belirli mikroorganizma türlerinin gelişimini baskılayabilir, ancak diğer türleri etkilemezler. Örnekler: Müller ortamı tifo-paratifo bakterileri için seçicidir, furazolidon-tween agar ise korinebakteriler ve mikrokoklar için seçicidir. Besiyerine antibiyotiklerin eklenmesi onları mantarlara karşı seçici hale getirir (örn. Sabouraud besiyeri, vb.).
3. Diferansiyel teşhis- Mikroorganizmaların biyokimyasal özelliklerini belirlemeyi ve onları ayırt etmeyi mümkün kılan bir grup ortam. Proteolitik, peptolitik, sakkarolitik, hemolitik, lipolitik ve indirgeyici özelliklerin belirlenmesi için ortamlara ayrılırlar (Endo, Levin, Ploskirev, Gissa media).
4. Koruyucu (taşıma) -
Toplama anından itibaren mikroorganizmaların canlılığını korumak için tasarlanmıştır
teşhis için tohumlamadan önce biyomateryal
Sıvı(et suları) - fizyolojik ve biyokimyasal özelliklerin ve mikroorganizma biyokütlesinin birikiminin incelenmesi
Yarı sıvı(%1 agar) – kültürlerin depolanması ve anaerobların yetiştirilmesi
Yoğun(%3-5 agar) – saf kültürlerin izolasyonu, birikim, niceliksel kayıt, kültürel varlıkların incelenmesi, düşmanca ilişkiler
Toplu– sanayide tohumun depolanması (darı, kepek)
Kuru– Besleyici ortamların hazırlanması için endüstri tarafından üretilmiştir
Stuart ortamına sahip taşıma sistemi
Stewart besiyeri, aşağıdakiler gibi çok çeşitli patojenik mikroorganizmaların korunması ve taşınması için yarı katı, besin açısından fakir bir substrattır. Neisseria gonorrhoeae, Haemophilus influenzae, Corynebacterium diphteriae, Trichomonas vajinalis, Streptococcus sp., Salmonella sp., Shigella sp. vb. En zorlu mikroorganizmalar bu ortamda bir günden fazla hayatta kalır, diğerleri ise birkaç güne kadar hayatta kalır.
Ortamda tiyoglikolat bulunması bakterilerin enzimatik aktivitesini bastırır, nitrojenin yokluğu ise üremelerini engeller.
Çevre ile taşıma sistemi Keri Blair
Keri Blair'in taşıma ortamı, Stewart'ın dışkı örnekleri için özel olarak tasarlanmış temel taşıma ortamının bir modifikasyonudur.
Bazı enterobakterilerin bir metaboliti olan gliserofosfat ( Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, vb.), inorganik fosfatla değiştirilir,
Metilen mavisi çıkarıldı ve ortamın pH'ı 8.4'e yükseltildi.
Keri Blair'in ortamı, güç üreyen mikroorganizmalar da dahil olmak üzere çoğu patojenin korunmasına olanak tanır. Neisseria sp., Haemophilus sp., Streptococcus sp..
Bu ortam anaerobların taşınması için standarttır.
Ames ortamına sahip taşıma sistemi
Ames taşıma ortamı, gliserofosfatın bazı enterobakterilerin bir metaboliti olması nedeniyle gliserofosfatın inorganik fosfatla değiştirildiği temel Stewart taşıma ortamının başka bir modifikasyonudur (1). Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae ve diğerleri.) ve bazı gram negatif mikroorganizmaların büyümesini destekleyebilir.
Metilen mavisi, farmasötik sınıf aktif karbonla değiştirildi.
Bakteriyel hücre geçirgenliğini korumak için ortama kalsiyum ve magnezyum eklendi.
Bu ortam aşağıdaki gibi mikroorganizmaları destekleyebilir: Neisseria sp., Haemophilus sp., Corynebacteria, Streptococci, Enterobacteriaceae vb. ancak en iyi sonuçlar ilk 24 saat içerisinde ekim yapılarak alınır.
Evrensel zenginleştirme ortamı: Et pepton agar (MPA) ve Et pepton suyu (MPB)
Biyokimyasal ve serotipleme öncesinde kültürlerin saflığını kontrol etmek amacıyla mikroorganizmaların aşılanması için ana ortamlardır.
Gösterişsiz mikroorganizmaların yetiştirilmesi ve sayılması için kullanılırlar. Yarı sıvı formda ortam, kontrol (referans) mikroorganizmalarını depolamak için kullanılabilir.
Evrensel depolama ortamları Hottinger ortamı
Enterobakteriler, Pseudomonas aeruginosa, stafilokoklar ve bazı streptokok türleri gibi çeşitli mikroorganizmaların yetiştirilmesi için tasarlanmıştır. Gerektiğinde karbonhidrat ve tuzlarla zenginleştirilebilir.
Kıymanın (sığır eti) pankreatin ile enzimatik hidrolizi, ardından filtrasyon ve koruyucu olarak kloroform eklenmesiyle elde edilen Hottinger hidrolizatını içerir.
Evrensel depolama ortamları:Mueller-Hinton ortamı
Bu ortam ekim için kullanılır Neisseria sp. ve mikroorganizmaların antimikrobiyal ajanlara duyarlılığının belirlenmesi.
Çarşamba McConkey
MacConkey besiyeri, enterobakterilerin ve ilgili gram-negatif basillerin seçici izolasyonu için diferansiyel besiyeri olarak önerilir.
Laktoz pozitif suşlar, safra tuzu çökelmesi bölgesi ile çevrelenebilen pembe veya kırmızı kolonilerle büyür.
Kırmızı renk, ortamın laktoz ayrışma ürünleriyle asitleştirilmesi (pH 6,8'in altına düştüğünde) ve nötr kırmızının adsorpsiyonu sonucu ortaya çıkar.
Laktozu fermente etmeyen suşlar (Shigella, Salmonella) genellikle şeffaf, renksiz koloniler oluşturur ve çevreyi değiştirmezler.
Diferansiyel teşhis ortamları:Endo ortamı
Bu besiyeri Endo tarafından laktozu fermente eden ve fermente etmeyen mikroorganizmaların ayrımına yönelik bir kültür ortamı olarak geliştirilmiştir. Su, atık su, süt ürünleri ve diğer gıda ürünlerinin mikrobiyolojik incelemesinde kullanılır.
Sodyum sülfit ve bazik fuksin, gram pozitif mikroorganizmalar üzerinde engelleyici bir etkiye sahiptir. Laktoz mikroorganizmalar tarafından aldehit ve asitlere ayrıştırılır. Aldehit ise fuksin-sülfit kompleksinden fuksini serbest bırakarak kolonilerin kırmızı rengini artırır. E. coli'de bu reaksiyon çok belirgindir ve buna, kolonilerin yeşilimsi metalik parlaklığı (muchsin parlaklığı) ile kendini gösteren fuksinin kristalleşmesi eşlik eder.
Diferansiyel teşhis ortamları:Sarısı tuzlu agar
Bu besiyeri, klinik açıdan önemli stafilokok kültürlerinin izole edilmesi için seçici bir besiyeri olarak kullanılır.
Mannitol, fermente edilebilir ve farklılaştırıcı bir substratın yanı sıra bir karbon kaynağıdır.
Yumurta sarısı emülsiyonunun (%5 h/h'ye kadar) eklenmesi, mikroorganizmaların lipaz aktivitesinin belirlenmesini mümkün kılar. Tuzlu ortamda emülsiyon şeffaf hale gelir, dolayısıyla lipaz aktivitesinin varlığında kolonilerin çevresinde sarı opak bir bölge oluşur.
Diferansiyel teşhis ortamları:Wilson-Blair veya Bizmut Sülfit Agar
Salmonella izolasyonu için seçici besiyeri.
Hayvan dokusunun ve et ekstraktının peptik sindirimi, bu bakterilerin büyümesi için gerekli olan azotlu besin maddeleri, karbon, kükürt, B vitaminleri ve eser elementlerin kaynağı olarak hizmet eder.
Parlak yeşil, tüm gram pozitif bakterilerin büyümesini engeller. Glikoz fermente olabilen bir karbonhidrattır. Demir sülfat hidrojen sülfit üretimini tespit edebilir.
Bizmut, Salmonella dışındaki gram-negatif bağırsak bakterilerinin çoğunun büyümesini engelleyen ağır bir metaldir.
Salmonella, glikoz ve bizmut sülfit varlığında demir sülfatı demir sülfüre indirgeyerek kolonilerini siyaha çevirir.
Özel seçmeli ortamlar:Loeffler'in ortamı
At serumu ilaveli bu besiyeri yetiştirme için kullanılır Corynebacterium difteri klinik materyalden ve bu mikroorganizmaların saf kültürlerinin alt kültürlerinden.
Yüksek serum konsantrasyonu, mikroorganizmaların proteolitik aktivitesinin yanı sıra pigment oluşumunun belirlenmesine yardımcı olur. Pepton ve et özütü mikroorganizmalara gerekli besin maddelerini sağlar. Glikoz fermente olabilen bir substrat ve enerji kaynağıdır.
Özel seçici medya:Kampilobakagar
Koyun kanı veya at kanı içeren kan agar bazı ve antibiyotiklerden oluşan Campylobacter için seçici besiyeri.
Antimikrobiyal bileşenler normal mikrofloranın büyümesini önemli ölçüde engelleyerek büyümeyi ve dışkıdan atılımı teşvik eder. Campylobacter fetus ssp. jejuni.
Takviyede amfoterisin B'nin varlığı, mantarların büyümesini önemli ölçüde veya tamamen bastırır; daha sonra eklenen sefalotin, normal bağırsak mikroflorasının baskılanmasını arttırır.
Koloniler Campylobacter fetus ssp. jejuni doğası gereği mukuslu, düz gri, düzensiz hatlı veya kabarık, yuvarlak, hemolizsiz.
Bazı suşlar sarı-kahverengi veya pembemsi koloniler üretebilir.
Ortamın nemli yüzeyinde birleşik büyüme veya kaynaşma meydana gelebilir.
Besin ortamları, laboratuvar uygulamalarında mikroorganizmaların ve diğer biyolojik nesnelerin yetiştirilmesi için kullanılan substratlardır. Mikroorganizmaların büyümesi, besin ortamında çeşitli tuzlar, vitaminler vb. şeklinde yeterli miktarda organik ve inorganik maddenin varlığına bağlıdır. Besin ortamı ayrıca optimum fiziksel ve kimyasal özelliklere sahip olmalıdır: pH, viskozite, nem, ozmotik özellikler.
Çoğu zaman, proteinlerin kısmi parçalanmasının ürünleri - peptonlar veya çeşitli et infüzyonları ve ekstraktları - besin ortamının organik bir bileşeni olarak kullanılır. Bu bileşenler, çoğunlukla mikrobiyal kültürlerin yetiştirilmesi için kullanılan, geleneksel besin ortamları olarak adlandırılan birçok ürünün üretiminde kullanılır ve aynı zamanda daha karmaşık besin ortamlarının temelini oluşturur. Yaygın kültür ortamları arasında et pepton suyu ve Hottinger suyu bulunur. Kültürlenen mikroorganizmanın türüne bağlı olarak genel kültür ortamı, çeşitli bakteriyel büyüme faktörlerinin takviyelerini içerir. Bazı durumlarda bunlar saf vitaminler ve amino asitler olabilir, diğerlerinde ise çeşitli doğal substratların özleri olabilir. Örneğin, patojenleri büyütmek için karaciğer dokusu sindirici katkı maddeleri kullanılır ve boğmaca öksürüğü patojeni, kan içeren ortamlarda yetiştirilir.
Özel besin ortamları, incelenen materyaldeki herhangi bir mikroorganizma tipini veya onun bireysel biyokimyasal veya fizyolojik özelliğini seçici olarak tanımlamak gerektiğinde kullanılan ortamları içerir. Özel besin ortamları aşağıdakileri içerir.
1. Seçmeli veya seçici ve zenginleştirme ortamları. Bu tür ortamlarda herhangi bir mikroorganizma türünün gelişmesi için uygun koşullar yaratılırken diğer tüm mikrop türlerinin gelişmesi engellenir. Bunu yapmak için ya yalnızca incelenen mikrobun kullanabileceği ortama besinler eklenir ya da bu mikrobun duyarsız olduğu çeşitli engelleyici faktörler eklenir. Bu tür kültür ortamları, incelenen materyalde diğer formlara kıyasla çok küçük miktarlarda bulunan mikroorganizmaların doğasını izole etmek ve belirlemek için kullanılır. Seçici ortam örnekleri, safra veya safra tuzları ve parlak yeşil içeren ortamların yanı sıra patojenik bağırsak bakterilerini izole etmek için kullanılan selenit içeren ortamlardır. Bu ortamlar E. coli'yi baskılar. Difteri patojenlerinin birincil kültürleri için, diğer tüm mikrop türlerinin çok daha yavaş büyüdüğü pıhtılaşmış at serumu kullanılır.
2. Ayırıcı tanı ortamları. Bu kültür ortamları bakteri kültürlerini tanımlamak için kullanılır. Ayırıcı tanı amaçlı besin ortamlarının kullanımı, üzerinde bakteriler büyüdüğünde ortamın bileşenlerinde kolayca gözlemlenebilen kimyasal değişikliklerin meydana gelmesi gerçeğine dayanmaktadır. Ayırıcı tanısal besin ortamlarının değişken bir bileşeni olarak, çeşitli protein maddeleri, şekerler ve çok atomlu maddeler en sık kullanılır; bunun mikroplar tarafından parçalanmasının bir sonucu olarak, renk değişikliği ile dikkate alınan ortamın reaksiyonu değişir. ortama eklenen göstergelerin sayısı, gaz kabarcıklarının görünümü vb. Yaygın olarak kullanılan Ayırıcı tanısal besin ortamı örnekleri, mikropların çeşitli şekerleri fermente etme yeteneğini belirlemek için kullanılan alacalı seriler olarak adlandırılan ortamlar olarak hizmet edebilir (Hiss ortamı, vesaire.). Ayrıca bkz. Diferansiyel tanılama ortamları.
Besin ortamları bakteriyolojik araştırmanın temelini oluşturur. İncelenen materyalden saf mikrop kültürlerinin izole edilmesine ve özelliklerinin incelenmesine hizmet ederler. Besin ortamı mikroorganizmaların çoğalması için en uygun koşulları yaratır. Ortam, sitoplazmanın tüm bileşenlerinin yapımı için gerekli maddeleri içermelidir; Canlı bir organizmanın tüm büyüme kaynakları. Bunlar öncelikle nitrojen, karbon, hidrojen ve oksijen kaynaklarını içerir.
Besin ortamındaki hidrojen ve oksijenin kaynağı sudur. Azotun kaynağı et, balık, plasenta, süt, yumurta ve kandan elde edilen organik bileşiklerdir. Pankreatin veya trypsin ile hidroliz sonucunda bu ürünler sözde üretilir. çoğu mikroorganizma tarafından iyi emilen, çok miktarda amino asit ve pepton içeren hidrolizatlar. Doğal protein yalnızca ekzoproteazlara sahip bazı mikroorganizmalar tarafından sindirilir. Hidrolizatlar birçok mikroorganizma için ortam hazırlamanın temelini oluşturur.
Patojenik mikroplar için karbon kaynağı esas olarak çeşitli karbonhidratlardır: mono ve disakkaritler, polihidrik alkoller, organik asitler ve bunların tuzları.
Organojenlere ek olarak bakteriler, fosfor, potasyum, kükürt, sodyum, magnezyum, demir içeren inorganik bileşiklerin yanı sıra kobalt, iyot, manganez, bor, çinko, molibden, bakır vb. mikro elementlere de ihtiyaç duyar.
Mikroorganizmaların inorganik bileşiklere olan ihtiyacı, besin ortamına KH2PO4 K2HPO4 ve diğer tuzların eklenmesiyle karşılanır. Kimyasal işlemler için katalizör görevi gören mikro elementlere ihmal edilebilir miktarlarda ihtiyaç duyulur ve besin ortamına pepton, inorganik tuzlar ve su ile girer. Listelenen organik elementlerin yanı sıra birçok mikroorganizmanın büyüme faktörlerine ihtiyacı vardır; kendilerinin sentezleyemediği maddelerde. Besin ortamlarına hazır formda büyüme faktörleri eklenmelidir. Büyüme faktörleri, besin ortamındaki kaynağı, besin ortamına eklenen, nikotinik, pantotenik, parabenzoik asitler, A, B, C vitaminleri vb. içeren bitki ve hayvan kökenli ürünler olan çeşitli vitaminleri içerir.
Besinler mikroplar tarafından ancak belirli bir çevresel reaksiyon altında emilebilir, çünkü mikrobiyal hücre zarlarının geçirgenliği ortamın pH'ına bağlı olarak değişir.
Besin ortamı için gereksinimler.
1. Kültür ortamı mikropları beslemek için gerekli besinleri içermelidir.
2. Yetiştirilen mikrop türüne uygun bir pH reaksiyonuna sahip olun. -
3. Besleyici ortam yeterli neme ve viskoziteye sahip olmalıdır çünkü Mikroplar difüzyon ve ozmoz kanunlarına göre beslenirler.
4. İzotonik olun ve belirli bir redoks potansiyeline (rH2) sahip olun.
5. Kültür ortamı steril olmalı, böylece saf kültürlerin yetiştirilme olasılığı sağlanmalıdır.
Farklı mikrop türleri için besin ihtiyaçları ve fiziksel koşullar aynı değildir ve bu, evrensel bir besin ortamı yaratma olasılığını dışlar.
Tutarlılığa bağlı olarak katı ve sıvı besin ortamları vardır. Yoğun olanlar, sıvı olanlara yapışkan maddeler eklenerek hazırlanır: agar-agar veya jelatin! Agar-agar (Malay dilinde jöle), deniz yosunundan elde edilen bitki kökenli bir üründür. Agar-agar, 80-86°C sıcaklıkta suda çözünür, 36-40°C'de sertleşir ve bu nedenle farklı mikroorganizma gruplarının optimum sıcaklıkta yetiştirilmesi için besin ortamlarını sıkıştırmak için kullanılır.
Besin ortamları bileşimlerine ve amaçlarına göre sınıflandırılır.
1. Bileşime göre besin ortamları basit ve karmaşık olarak ayrılır
Bir grup genel amaçlı ortam vardır - basit. Bu grup, et-pepton suyunu (basit besin suyu), et-pepton agarını (basit besin agarı), besleyici jelatini içerir. Bu ortamlar birçok patojenik mikropun yetiştirilmesi için kullanılır. Genel amaçlı ortamlar veya basit besin ortamları genellikle pepton ve sodyum klorür ilavesiyle hidrolizatlardan hazırlanır. Ayrıca karmaşık ortamların hazırlanmasında temel olarak kullanılırlar.
2. İkinci grup seçmeli, özel ve ayırıcı tanı ortamlarını içermektedir.
Seçmeli ortamlar (seçici, seçici, birikim, zenginleştirme). Seçici besin ortamı oluşturma ilkesi, yetiştirilmesi amaçlanan mikrop türünün temel biyokimyasal ve enerji ihtiyaçlarının karşılanmasına veya eşlik eden mikrofloranın büyümesini baskılayan inhibitörlerin eklenmesine dayanır. Besin maddelerinin, mikro elementlerin, büyüme faktörlerinin kesin olarak tanımlanmış bir pH değerinde belirli bir bileşimi ve konsantrasyonu veya inhibitörlerin eklenmesi, bir veya daha fazla mikroorganizma türünün yetiştirilmesi için en uygun koşulları sağlar. Üzerine çeşitli mikropların karışımını içeren materyal ekildiğinde, ilk önce çevrenin seçici olacağı türün büyümesi solacaktır. Seçmeli ortamlara örnek olarak yumurta sarısı suyu, selenit suyu, bağırsak ailesinden mikropların büyümesi için Ploskirev ortamı, Vibrio cholerae için alkalin pepton suyu verilebilir.
Sarısı suyu. MPB'ye %10-20 öküz safrası eklenir. Safra, kokların ve hava florasının büyümesini engeller, ancak salmonellanın çoğalması için elverişlidir.
Selenit suyu. Kokkal flora ve Escherichia coli büyümesinin bir inhibitörü olan ancak salmonella büyümesini engellemeyen selenitin sodyum tuzunun eklenmesiyle fosfat et suyundan oluşur.
Çarşamba Ploskireva. E. coli ve coli inhibitörlerini içeren, ancak üremesi parlak yeşil ve safra tuzları tarafından inhibe edilmeyen Shigella ve Salmonella'nın büyümesi için uygun olan yoğun bir ortam.
Peptonlu su. %1 pepton ve %0,5 sodyum klorür içerir. Çevre, klor vibriyoları için seçicidir, çünkü "aç ortamlarda", özellikle alkali reaksiyonla diğer bakterilerden daha iyi çoğalırlar çünkü kendileri asidik atık ürünler salgılarlar.
Özel ortamlar. Basit besin ortamlarında büyümeyen bakterilerin yetiştirilmesi için gereklidir. Bazı organizmalar için basit besin ortamlarına karbonhidrat, kan ve diğer ek besin maddelerinin eklenmesi gerekir. Basit besin ortamı örnekleri, streptokoklar için şeker suyu ve şeker agarıdır (sırasıyla MPB ve MPA'dan hazırlanır ve bunlara %0,5-2 glikoz eklenir).
Pnömokok ve meningokoklar için özel besiyeri peynir altı suyu suyu ve peynir altı suyu agarıdır (peynir altı suyu suyu hazırlamak için 1 kısım MPB, 2 kısım taze serumla karıştırılır; peynir altı suyu agarı elde etmek için erimiş suya %10-25 steril at veya sığır serumu eklenir) MPA).
Metabolizmanın özelliklerine göre, incelenen mikropun türünü belirlemek için ayırıcı teşhis ortamları kullanılıyor.” Amaçlarına göre ayırıcı tanı ortamları şu şekilde ayrılır:
1. Süt, jelatin, kan vb. içeren, mikropların proteolitik yeteneğini belirlemek için ortam.
2. Karbonhidratlar ve polihidrik alkoller içeren ortamlar
çeşitli sakkarolitik enzimlerin tespiti.
Sakkarolitik özellikleri ve redoks enzimlerini tanımlamak için tasarlanmış ayırıcı teşhis ortamının bileşimine göstergeler eklenir: nötr kırmızı, asit fuksin, bromotimol mavisi, pembe asitli sulu mavi (BP). İndikatör, farklı pH değerlerinde rengini değiştirerek, bir enzimin varlığını ve ortama verilen bileşenin parçalanmasını gösterir.
Diferansiyel tanılama ortamlarına örnekler:
Endo ortamı. %1 laktoz ve sodyum sülfit ile rengi giderilmiş bazik fuksin (gösterge) ilavesiyle MPA'dan oluşur. Endo ortamı hafif pembe bir renge sahiptir. Bağırsak enfeksiyonlarının tanısında, laktozu asidik ürünler oluşturmak üzere parçalayan bakterileri, bu yeteneğe sahip olmayan bakterilerden ayırmak için kullanılır. Laktoz pozitif mikropların (Escherichia coli) kolonileri, fuksinin indirgenmesi nedeniyle kırmızıdır. Laktoz negatif mikroorganizmaların kolonileri - salmonella, shigella, vb. - renksizdir.
Ayırıcı teşhis ortamları, kısa ve genişletilmiş bir rengarenk seriyi içerir. Karbonhidratlar (Hiss media), MPB, süt ve et-pepton jelatin içeren ortamlardan oluşur.
Hiss ortamı, kimyasal olarak saf mono-, di- veya polisakkaritlerin (glikoz, laktoz, nişasta vb.) Eklendiği pepton suyu bazında hazırlanır.
Asit oluşumu ve karbonhidratların ayrışması sonucu oluşan pH değişimlerini tespit etmek için ortama bir gösterge eklenir. Karbonhidratların daha derin bir şekilde parçalanmasıyla, gazlı ürünler (CO2, CH4, vb.) oluşur ve bunlar, ortama baş aşağı indirilen küçük test tüpleri olan şamandıralar kullanılarak yakalanır. Karbonhidratlı ortamlar da %0,5-1 oranında agar-agar ilavesi ile yoğun ortam olarak hazırlanabilir. Daha sonra ortamın kolonunda kabarcıkların (kırılmaların) oluşmasıyla gaz oluşumu tespit edilir.
Rengarenk serinin bir parçası olan MPB'de amino asitlerin ve peptonların (indol, hidrojen sülfür) parçalanması sırasında oluşan ürünler bulunur. Hidrojen sülfit, kültürün ekilmesinden sonra kurşun asetat çözeltisine batırılmış bir filtre kağıdı şeridinin MPB'ye yerleştirilmesiyle tespit edilir. Kükürt içeren amino asitler parçalandığında hidrojen sülfit açığa çıkar ve kurşun sülfit oluşumu nedeniyle kağıt siyaha döner. İndolü belirlemek için karmaşık bir gösterge kullanılabilir. İndol, triptofanın parçalanmasıyla oluşur ve bu gösterge MPB üzerinde yetiştirilen bir kültüre eklendiğinde tespit edilebilir. İndol varlığında MPB yeşile veya maviye döner.
Kuru ortamlar.
Besin agarı ve ana diferansiyel teşhis ortamı şu anda gerekli tüm bileşenleri içeren kuru preparatlar formunda üretilmektedir. Bu tür tozlara sadece su ekleyip kaynatmanız ve ardından döktükten sonra sterilize etmeniz yeterlidir.
