વિષય: જીવંત કોષોમાં ઉત્સેચકોની ઉત્પ્રેરક પ્રવૃત્તિ

લક્ષ્ય:ઓળખો ઉત્પ્રેરક કાર્યજીવંત કોષોમાં પ્રોટીન, કોષોમાં ઉત્સેચકોની ભૂમિકા વિશે જ્ઞાન વિકસાવે છે, માઇક્રોસ્કોપ સાથે કામ કરવાની ક્ષમતાને એકીકૃત કરે છે, પ્રયોગો કરે છે અને કાર્યના પરિણામો સમજાવે છે. સાધન:કાચા અને બાફેલા બટાકા, એલોડિયા પર્ણ (બીજો છોડ), તાજા 3% હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડ સોલ્યુશન, ટેસ્ટ ટ્યુબ, ટ્વીઝર, રેતી, મોર્ટાર અને પેસ્ટલ, નોટબુક, પેન, પેન્સિલ, શાસક.

કાર્ય પ્રગતિ:

બે ટેસ્ટ ટ્યુબ તૈયાર કરો, અને પ્રથમમાં થોડી રેતી મૂકો, બીજામાં કાચા બટાકાનો ટુકડો, ત્રીજા ભાગમાં બાફેલા બટાકાનો ટુકડો દરેક ટેસ્ટ ટ્યુબમાં થોડો હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડ નાખો. દરેક ટેસ્ટ ટ્યુબમાં શું થાય છે તેનું અવલોકન કરો.

સાથે મોર્ટાર માં કાચા બટાકાની એક ટુકડો અંગત સ્વાર્થ નાની રકમરેતી

કચડી બટાકાને રેતીની સાથે ટેસ્ટ ટ્યુબમાં સ્થાનાંતરિત કરો અને તેમાં થોડો હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડ નાખો.

કચડી અને આખા છોડની પેશીઓની પ્રવૃત્તિની તુલના કરો.

વિવિધ સારવાર હેઠળ દરેક પેશીઓની પ્રવૃત્તિ દર્શાવતું કોષ્ટક બનાવો. તમારા પરિણામો સમજાવો. પ્રશ્નોના જવાબ આપો:

અવલોકનો

હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડ અને કાચા બટાકા

ઓક્સિજન છોડવામાં આવે છે, પ્રોટીન તૂટી જાય છે પ્રાથમિક માળખુંઅને ફીણમાં ફેરવાય છે

હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડ અને બાફેલા બટાકા

કોઈ પ્રતિક્રિયા નથી

પ્રશ્નોના જવાબ આપો: કઈ ટેસ્ટ ટ્યુબમાં કેટાલેઝ એન્ઝાઇમની પ્રવૃત્તિ દેખાય છે? શા માટે સમજાવો.

કેટાલેઝ એ એન્ઝાઇમ છે જે પાણી અને મોલેક્યુલર ઓક્સિજનમાં હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડના વિઘટનની પ્રતિક્રિયાને ઉત્પ્રેરિત કરે છે: H2O2 + H2O2 = O2 + 2H2O. જૈવિક ભૂમિકા K. સંખ્યાબંધ ફ્લેવોપ્રોટીન ઓક્સિડેઝ (xanthine oxidase, glucose oxidase, monoamine oxidase, etc.) ની ક્રિયાના પરિણામે કોષોમાં રચાયેલા હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડના અધોગતિનો સમાવેશ કરે છે અને પ્રભાવ હેઠળ વિનાશથી સેલ્યુલર માળખાને અસરકારક રક્ષણ પૂરું પાડે છે. હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડનું. આનુવંશિક રીતે નિર્ધારિત કે. ઉણપ એ કહેવાતા એકટાલેસિયાના કારણોમાંનું એક છે, એક વારસાગત રોગ જે તબીબી રીતે અનુનાસિક શ્વૈષ્મકળામાં અલ્સરેશન દ્વારા પ્રગટ થાય છે અને મૌખિક પોલાણ, ક્યારેક મૂર્ધન્ય સેપ્ટામાં ઉચ્ચારણ એટ્રોફિક ફેરફારો અને દાંતના નુકશાન. પ્રવૃત્તિ 1.3 ટેસ્ટ ટ્યુબમાં પોતાને પ્રગટ કરે છે, કારણ કે તેઓ પ્રોટીન ધરાવતા કાચા ખોરાક ધરાવે છે. અને બાકીની ટેસ્ટ ટ્યુબમાં રસોઈ પ્રક્રિયા દરમિયાન નાશ પામેલા પ્રોટીન સાથેના ઉત્પાદનો હતા અને પ્રતિક્રિયા દેખાતી ન હતી. તેથી, શરીર પ્રોટીન ધરાવતા ખોરાકને વધુ સારી રીતે શોષી લે છે.

એન્ઝાઇમ પ્રવૃત્તિ જીવંત અને મૃત પેશીઓમાં કેવી રીતે પ્રગટ થાય છે?અવલોકન કરેલ ઘટના સમજાવો. મૃત પેશીઓમાં કોઈ એન્ઝાઇમ પ્રવૃત્તિ નથી, કારણ કે રસોઈ દરમિયાન તેમાં રહેલું પ્રોટીન નાશ પામ્યું હતું. અને જીવંત પેશીઓમાં, જ્યારે હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડ સાથે ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરવામાં આવે છે, ત્યારે ઓક્સિજન છોડવામાં આવે છે, અને પ્રોટીન, તેની પ્રાથમિક રચનાને તોડીને, ફીણમાં ફેરવાય છે.

ટીશ્યુ ગ્રાઇન્ડીંગ છોડ અને પ્રાણીઓના જીવંત પેશીઓમાં એન્ઝાઇમ પ્રવૃત્તિને કેવી રીતે અસર કરે છે?જીવંત પેશીઓને ગ્રાઇન્ડ કરતી વખતે, પ્રતિક્રિયા ઝડપથી આગળ વધે છે, કારણ કે પ્રોટીન અને હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડ વચ્ચેનો સંપર્ક વિસ્તાર તમે હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડના વિઘટનના દરને કેવી રીતે માપવાનો પ્રસ્તાવ મૂકશો? v=kc(a)c(b) જ્યાં v એ રાસાયણિક પ્રતિક્રિયાનો દર છે k એ દર સ્થિરતા છે c એ સાંદ્રતામાં ફેરફાર છે શું તમને લાગે છે કે તમામ જીવંત જીવોમાં એન્ઝાઇમ કેટાલેઝ હોય છે, જે હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડના વિઘટનને સુનિશ્ચિત કરે છે?

તમારા જવાબને યોગ્ય ઠેરવો. આ ઓક્સિડોરેડક્ટેઝ વર્ગનું એન્ઝાઇમ હોવાથી, તે હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડના વિઘટનને ઉત્પ્રેરિત કરે છે, જે જીવંત કોષો માટે ઝેરી છે, પાણી અને ઓક્સિજનમાં. લિસોસોમ્સમાં સમાયેલ છે. અમે નિષ્કર્ષ પર આવી શકીએ છીએ કે તે જીવંત જીવોના તમામ કોષોમાં સમાયેલ છે. તમારા અવલોકનો સમજાવો. તમારું નિષ્કર્ષ જણાવો.

નિષ્કર્ષ: પ્રોટીન ફક્ત જીવંત ખોરાકમાં સમાયેલ છે, અને રાંધેલા ખોરાકમાં પ્રોટીન નાશ પામે છે, તેથી તેમની સાથે કોઈ પ્રતિક્રિયા થતી નથી. જો તમે ઉત્પાદનોને ગ્રાઇન્ડ કરો છો, તો પ્રતિક્રિયા ઝડપથી આગળ વધશે.

કેટાલેઝ પ્રવૃત્તિનું નિર્ધારણ

(A.N. Bach અને A.I. Oparin અનુસાર)

ઓક્સિડોરેડક્ટેસ એ એન્ઝાઇમનો એક વર્ગ છે જે રેડોક્સ પ્રતિક્રિયાઓને ઉત્પ્રેરિત કરે છે. પોલિમરના અપચય દરમિયાન રચાયેલી મોનોમરનું ઓક્સિડેશન એ એક જટિલ બહુ-તબક્કાની પ્રક્રિયા છે.

કોશિકાઓમાં પદાર્થોનું ઓક્સિડેશન મુખ્યત્વે હાઇડ્રોજન (ડિહાઇડ્રોજનેશન) દૂર કરીને અથવા ઇલેક્ટ્રોનને દૂર કરીને અથવા ઓક્સિડાઇઝ્ડ સંયોજનના પરમાણુમાં ઓક્સિજનના ઉમેરા દ્વારા થાય છે.

ડિહાઇડ્રોજેનેસિસમાં હાઇડ્રોજન સ્વીકારનારાઓ NAD +, NADP, FAD અને FMN છે, કેટલાક ફ્લેવિન્સમાં - ઓક્સિજન (તેમને ઓક્સિડેસિસ કહેવામાં આવે છે), હેમ ધરાવતા લોકોમાં (પેરોક્સિડેસિસ અને કેટાલેસેસ) - H 2 O 2 (હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડ).

ઇલેક્ટ્રોન સ્વીકારનારા અને વાહકો હેમ ધરાવતા સાયટોક્રોમ્સ (હિમોપ્રોટીન) છે.

કેટાલેઝ (EC 1.11.1.6) હિમોપ્રોટીનથી સંબંધિત છે, હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડના વિનાશની પ્રક્રિયાને ઉત્પ્રેરિત કરે છે, જે કોષો માટે ઝેરી છે, પાણી અને ઓક્સિજનમાં: 2 H 2 O 2 = 2 H 2 O + O 2.

જીવંત કોષ માટે, હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડ એ એક મજબૂત ઝેર છે, તેથી બધા ઉત્સેચકો જે H 2 O 2 બનાવે છે અને નિષ્ક્રિય કરે છે તે પેરોક્સિસોમ્સમાં સ્થિત છે - પટલ-આચ્છાદિત ઓર્ગેનેલ્સ. H 2 O 2 ના મુખ્ય ઉપભોક્તાઓ પેરોક્સિડેઝ (EC 1.11.1.7.) છે, જે ફિનોલ્સ, એમાઇન્સ, કેટલાકને ઓક્સિડાઇઝ કરે છે. હેટરોસાયકલિક સંયોજનોઅને ડિહાઈડ્રોજનેશન દ્વારા અન્ય સબસ્ટ્રેટ્સ, સબસ્ટ્રેટમાંથી કાઢી નાખેલાને H 2 O 2 માં સ્થાનાંતરિત કરો, તેને 2 H 2 O માં ઘટાડીને. હાઈડ્રોજન પેરોક્સાઇડ પરમાણુઓ, પેરોક્સિડેસિસ દ્વારા દાવો ન કરાયેલ, કેટાલેઝ દ્વારા તટસ્થ કરવામાં આવે છે.

કેટાલેઝ પ્રવૃત્તિ નક્કી કરવાની પદ્ધતિ એન્ઝાઇમ સાથેના સેવન દરમિયાન તૂટી ગયેલા હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડની માત્રા નક્કી કરવા પર આધારિત છે. પ્રતિક્રિયા મિશ્રણમાં H 2 O 2 ની માત્રા 0.02 mol/l ના પોટેશિયમ પરમેંગેનેટ સાંદ્રતા સાથેના દ્રાવણ સાથે એસિડિક માધ્યમમાં ટાઇટ્રેશન દ્વારા નક્કી કરવામાં આવે છે:

5 H 2 O 2 + 2KMnO 4 + 3H 2 SO 4 = 2MnSO 4 + K 2 SO 4 + 5O 2 +8H 2 O

ઉપરોક્ત પ્રતિક્રિયા સમીકરણના આધારે, તે ગણતરી કરી શકાય છે કે 0.02 mol/l ની પોટેશિયમ પરમેંગેનેટ સાંદ્રતા સાથે 1 મિલી દ્રાવણ એ 1.7 મિલિગ્રામ (50 µmol) હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડને અનુરૂપ છે.

કામની પ્રગતિ. 2-3 ગ્રામ કાચા બટાકા (અથવા અન્ય તાજા છોડની સામગ્રી) ક્વાર્ટઝ રેતી અથવા કાચ સાથે મોર્ટારમાં સારી રીતે ગ્રાઉન્ડ કરવામાં આવે છે. ઘટાડવા માટે એસિડ પ્રતિક્રિયાજ્યાં સુધી CO 2 બબલ્સનું પ્રકાશન બંધ ન થાય ત્યાં સુધી સ્કેલ્પેલની ટોચ પર CaCO 3 ઉમેરો. ગ્રાઇન્ડીંગ પ્રક્રિયા દરમિયાન, મોર્ટારમાં નાના ભાગોમાં 40-50 મિલી પાણી ઉમેરો. ગ્રાઉન્ડ માસને જથ્થાત્મક રીતે 100 મિલી વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં સ્થાનાંતરિત કરવામાં આવે છે, જે પાણી સાથે ચિહ્ન સાથે ગોઠવાય છે અને મિશ્રિત થાય છે. મિશ્રણને 10-15 મિનિટ સુધી રહેવા માટે છોડી દેવામાં આવે છે અને હલાવતા પછી, ફિલ્ટર કરવામાં આવે છે.

150-200 મિલીની ક્ષમતાવાળા બે શંકુ આકારના ફ્લાસ્ક લો અને તેમાં પરિણામી ફિલ્ટ્રેટના 20 મિલી ઉમેરો. એક ફ્લાસ્કની સામગ્રીને 1 મિનિટ માટે ઉકાળવામાં આવે છે અને ઓરડાના તાપમાને (નિયંત્રણ) ઠંડુ કરવામાં આવે છે. અન્ય પ્રાયોગિક ફ્લાસ્કમાં સક્રિય એન્ઝાઇમ હોય છે. ટેસ્ટ અને કન્ટ્રોલ ફ્લાસ્કની સામગ્રીમાં 20 મિલી પાણી અને 3 મિલી સોલ્યુશન ઉમેરો. સમૂહ અપૂર્ણાંક H 2 O 2 1%. સમાવિષ્ટો સંપૂર્ણપણે મિશ્ર કરવામાં આવે છે અને ઓરડાના તાપમાને 30 મિનિટ માટે છોડી દેવામાં આવે છે. સેવનના અંતે, 10% સલ્ફ્યુરિક એસિડના સામૂહિક અપૂર્ણાંક સાથેના 5 મિલી દ્રાવણને બંને ફ્લાસ્કમાં મિશ્રિત કરવામાં આવે છે અને દરેક ફ્લાસ્કમાં વધારાનું H 2 O 2 0.02 ની પોટેશિયમ પરમેંગેનેટ સાંદ્રતાવાળા દ્રાવણ સાથે ટાઇટ્રેટ કરવામાં આવે છે. mol/l જ્યાં સુધી ગુલાબી રંગ ન બને, જે 1 મિનિટની અંદર અદૃશ્ય થતો નથી.

કેટાલેઝ પ્રવૃત્તિ 1 મિનિટ દીઠ પરીક્ષણ સામગ્રીના 1 ગ્રામ (અથવા તેમાંથી 1 મિલિગ્રામ અર્ક દીઠ) એન્ઝાઇમ દ્વારા ભાંગી હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડના µmol માં દર્શાવવામાં આવે છે. ગણતરી સૂત્ર અનુસાર હાથ ધરવામાં આવે છે:

જ્યાં એક્સ- કેટાલેઝ પ્રવૃત્તિ, ઇ/જી;

(a-b)- 0.02 mol/l ની પોટેશિયમ પરમેંગેનેટ સાંદ્રતાવાળા સોલ્યુશનના જથ્થા વચ્ચેનો તફાવત, નિયંત્રણના ટાઇટ્રેશન માટે વપરાય છે (A)અને અનુભવી (b)નમૂનાઓ, મિલી;

ટી- ટાઇટ્રેશન માટે વપરાતા પોટેશિયમ પરમેંગેનેટ સોલ્યુશનનું ટાઇટર;

50 – રૂપાંતરણ પરિબળ પ્રતિ µmol H 2 O 2;

100 - તૈયાર અર્કની કુલ માત્રા;

m – વિશ્લેષણ માટે લેવામાં આવેલ સામગ્રીનો સમૂહ, g;

20 – વિશ્લેષણ માટે લેવામાં આવેલ ફિલ્ટ્રેટનું પ્રમાણ, મિલી;

30 – સેવનનો સમય, મિનિટ.

નિર્ધારણ સિદ્ધાંત, વિશ્લેષણ પ્રક્રિયા અને વિશ્લેષણ પરિણામ રેકોર્ડ કરવામાં આવે છે.

ટેસ્ટ ઑબ્જેક્ટમાં H 2 O 2 ઉમેર્યા પછી પ્રકાશિત થયેલા ઑક્સિજનના જથ્થા દ્વારા પણ કૅટાલેઝ પ્રવૃત્તિ નક્કી કરી શકાય છે.

આ સિદ્ધાંતનો ઉપયોગ દૂધમાં કેટાલેઝની પ્રવૃત્તિને નિર્ધારિત કરવા માટે થાય છે, જે કેટાલેઝ નંબર દ્વારા વ્યક્ત કરવામાં આવે છે, જે H 2 O ના સમૂહ અપૂર્ણાંક સાથેના 5 મિલિગ્રામ દ્રાવણમાંથી 2 કલાકમાં 25 ° સે તાપમાને ઓક્સિજન (એમએલ) નું પ્રમાણ છે. 15 મિલી દૂધમાં 2 1% ઉમેરવામાં આવે છે. તંદુરસ્ત પ્રાણીઓમાંથી મેળવેલ દૂધ 0.7-2.5 મિલી ઓક્સિજન છોડે છે, એટલે કે. કુદરતી દૂધની કેટાલેઝ સંખ્યા 2.5 થી વધુ નથી. બીમાર પ્રાણીઓ (માસ્ટાઇટિસ, વગેરે) અને કોલોસ્ટ્રમમાંથી મેળવેલા દૂધમાં કેટાલેઝની સંખ્યામાં વધારો થયો છે, જે 15 સુધી પહોંચે છે.

રીએજન્ટ્સ. નિસ્યંદિત પાણી; કેલ્શિયમ કાર્બોનેટ (પાવડર); 0.02 mol/l ની પોટેશિયમ પરમેંગેનેટ સાંદ્રતા સાથે ઉકેલ; સામૂહિક અપૂર્ણાંકો સાથેના ઉકેલો: હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડ 1% (H 2 O 2 30% ના સમૂહ અપૂર્ણાંક સાથે 10 ml દ્રાવણ 300 ml સુધી પાણીમાં ભળે છે), સલ્ફ્યુરિક એસિડ 10%.

પરીક્ષણ પ્રશ્નો.

1. કોષમાં સબસ્ટ્રેટ્સના ઓક્સિડેશન માટેના મુખ્ય માર્ગો.

2. એનએડી + - અને એનએડીપી-આશ્રિત ડિહાઇડ્રોજેનેસિસની રચના અને ક્રિયાની લાક્ષણિકતાઓ.

3. એફએડી-આશ્રિત ડિહાઇડ્રોજેનેસિસની રચના અને ક્રિયાની લાક્ષણિકતાઓ.

4. કયા ઉત્સેચકોને ઓક્સિડેઝ કહેવામાં આવે છે? તેમના કોફેક્ટર્સ.

5. પેરોક્સિડેઝ અને કેટાલેસેસની રચના અને ક્રિયાની લાક્ષણિકતાઓ.

6. સાયટોક્રોમ્સની રચના અને ક્રિયાની લાક્ષણિકતાઓ.

7. રસાયણશાસ્ત્ર, રચના અને કોષોમાં હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડને તટસ્થ કરવાની રીતો.

8. કેટાલેઝ પ્રવૃત્તિ નક્કી કરવા માટેની પદ્ધતિ.

ઉત્સેચકો બાયોકેમિકલ પ્રતિક્રિયાઓના પ્રોટીન ઉત્પ્રેરક છે, સૌથી વધુજે એન્ઝાઇમની ગેરહાજરીમાં અત્યંત ધીમી ગતિએ આગળ વધે છે. વિપરીત રાસાયણિક ઉત્પ્રેરકદરેક એન્ઝાઇમ માત્ર ખૂબ જ ઓછી સંખ્યામાં પ્રતિક્રિયાઓને ઉત્પ્રેરિત કરવામાં સક્ષમ છે, ઘણી વખત માત્ર એક જ.

આમ, ઉત્સેચકો પ્રતિક્રિયા-વિશિષ્ટ ઉત્પ્રેરક છે. લગભગ તમામ બાયો રાસાયણિક પ્રતિક્રિયાઓઉત્સેચકો દ્વારા ઉત્પ્રેરિત.

ઘણા ઉત્સેચકો હોય છે ઉત્પ્રેરક ક્રિયાસબસ્ટ્રેટ પર માત્ર ચોક્કસ થર્મોસ્ટેબલ લો-મોલેક્યુલર ઓર્ગેનિક કમ્પાઉન્ડની હાજરીમાં - એક સહઉત્સેચક.

આવા કિસ્સાઓમાં, હોલોએન્ઝાઇમ (ઉત્પ્રેરક રીતે સક્રિય સંકુલ) એપોએન્ઝાઇમ (પ્રોટીન ભાગ) અને સંકળાયેલ સહઉત્સેચક (પરિશિષ્ટ H) નો સમાવેશ થાય છે. સહઉત્સેચકને સહસંયોજક અને બિન-સહસંયોજક બોન્ડ દ્વારા એપોએન્ઝાઇમ સાથે જોડી શકાય છે. "કૃત્રિમ જૂથ" શબ્દ સહસંયોજક રીતે જોડાયેલા સહઉત્સેચકનો સંદર્ભ આપે છે. કોએનઝાઇમની હાજરીની જરૂર હોય તેવી પ્રતિક્રિયાઓમાં નીચેનાનો સમાવેશ થાય છે: રેડોક્સ, ગ્રૂપ ટ્રાન્સફર, આઇસોમરાઇઝેશન અને કન્ડેન્સેશન પ્રતિક્રિયાઓ (IUB સિસ્ટમ મુજબ આ વર્ગ 1, 2, 5, 6 છે). સહઉત્સેચકોની ગેરહાજરીમાં ક્લીવેજ પ્રતિક્રિયાઓ થાય છે (IUB સિસ્ટમ મુજબ આ વર્ગ 3 અને 4 છે).

^ 4.1 લેબોરેટરી વર્ક "એમિલેસ પ્રવૃત્તિનું નિર્ધારણ
વોલ્જેમટ પદ્ધતિ અનુસાર માલ્ટ"

વોલ્જેમથની પદ્ધતિ એ એન્ઝાઇમની ન્યૂનતમ માત્રા નક્કી કરવા પર આધારિત છે જે ચોક્કસ પરિસ્થિતિઓમાં 0.1% સ્ટાર્ચ દ્રાવણના 1 મિલીનું સંપૂર્ણપણે હાઇડ્રોલાઈઝ કરી શકે છે. માલ્ટની એમીલેઝ પ્રવૃત્તિ 0.1% સ્ટાર્ચ સોલ્યુશનના મિલીલીટરની સંખ્યા દ્વારા દર્શાવવામાં આવે છે, જેને 30 મિનિટ માટે 38 °C તાપમાને 1 મિલી માલ્ટ અર્ક દ્વારા હાઇડ્રોલાઇઝ કરી શકાય છે. સામાન્ય એમીલેઝ પ્રવૃત્તિ 160 અને 320 પ્રવૃત્તિ એકમો વચ્ચે હોય છે.

રક્ત અને પેશાબની એમીલેઝ પ્રવૃત્તિને નિર્ધારિત કરવા માટે અને માલ્ટની એમીલેઝ પ્રવૃત્તિને નિર્ધારિત કરવા માટે વહોલજેમથ પદ્ધતિનો વ્યાપકપણે તબીબી પ્રેક્ટિસમાં ઉપયોગ થાય છે. તીવ્ર સ્વાદુપિંડ અને સ્વાદુપિંડની ગાંઠોમાં લોહી અને પેશાબમાં (10-30 વખત) એમીલેઝ પ્રવૃત્તિમાં તીવ્ર વધારો જોવા મળે છે.

^ સામગ્રી અને રીએજન્ટ્સ: અનાજના માલ્ટમાંથી અર્ક, 10 વખત પાતળું; 0.1% સ્ટાર્ચ સોલ્યુશન; પોટેશિયમ આયોડાઇડના 0.2% દ્રાવણમાં આયોડીનનું 0.1% દ્રાવણ.

સાધન:ટેસ્ટ ટ્યુબ, પિપેટ્સ, ડ્રોપર્સ, થર્મોસ્ટેટ સાથે ઊભા રહો.

^ કામની પ્રગતિ.દસ ટેસ્ટ ટ્યુબ 1 મિલી નિસ્યંદિત પાણીથી ભરેલી છે. પ્રથમ ટેસ્ટ ટ્યુબમાં 10 વખત ભળેલો અર્કનો 1 મિલી ઉમેરો, મિક્સ કરો, મિશ્રણનું 1 મિલી બીજી ટેસ્ટ ટ્યુબમાં ટ્રાન્સફર કરવામાં આવે છે. આ ટેસ્ટ ટ્યુબના સમાવિષ્ટોને ફરીથી મિશ્રિત કરવામાં આવે છે અને 1 મિલી ત્રીજી ટેસ્ટ ટ્યુબમાં ટ્રાન્સફર કરવામાં આવે છે અને તેથી દસમી ટેસ્ટ ટ્યુબ સુધી. 1 મિલી છેલ્લી ટેસ્ટ ટ્યુબમાંથી લેવામાં આવે છે અને રેડવામાં આવે છે. આમ, દરેક અનુગામી ટેસ્ટ ટ્યુબમાં એન્ઝાઇમનું પ્રમાણ પાછલા એક કરતા બે ગણું ઓછું હોય છે. દસ ટેસ્ટ ટ્યુબમાં અર્કનું મંદન આ હશે: 1:10; 1:20; 1:40; 1:80; 1:160; 1:320; 1:640; 1:1280; 1:2560; 1:5120; 1:10240.

આગળ, તમામ ટેસ્ટ ટ્યુબમાં 1 મિલી પાણી અને 2 મિલી સ્ટાર્ચ સોલ્યુશન ઉમેરો, મિક્સ કરો અને તાપમાને થર્મોસ્ટેટમાં મૂકો. 30 મિનિટ માટે 38 °C. ઇન્ક્યુબેશન પછી, એન્ઝાઇમની ક્રિયાને રોકવા માટે નળના પાણીથી ટેસ્ટ ટ્યુબને ઠંડુ કરો, આયોડિન સોલ્યુશનના બે ટીપાં ઉમેરો, સારી રીતે હલાવો અને રંગ પરિવર્તનનું અવલોકન કરો. આયોડિન સાથે પ્રતિક્રિયા કરતી વખતે, પ્રવાહી પીળો, ગુલાબી અને જાંબલી થઈ જાય છે.

ન્યૂનતમ એન્ઝાઇમ સામગ્રી સાથે સ્ટાર્ચનું સંપૂર્ણ હાઇડ્રોલિસિસ કેવી રીતે પાતળું થયું તેની નોંધ લીધા પછી (સામગ્રીના પીળા રંગ સાથેની એક ટેસ્ટ ટ્યુબ), અર્કની એમીલેઝ પ્રવૃત્તિ આ ટેસ્ટ ટ્યુબમાં અનડિલ્યુટેડ અર્ક (A) ની માત્રાથી ગણવામાં આવે છે.
(એક મિલી અર્ક 0.1% સ્ટાર્ચ સોલ્યુશનના X મિલીને તોડે છે).

ઉદાહરણ તરીકે, પીળોચોથી ટેસ્ટ ટ્યુબમાં દેખાયો, જ્યાં અર્ક 160 વખત પાતળું કરવામાં આવ્યું હતું. અર્કનો આ જથ્થો 0.1% સ્ટાર્ચ સોલ્યુશનના 2 મિલી અને 1 મિલી અનડિલ્યુટેડ અર્કને 320 મિલી: X = 2 × 160/1ની સમાન પરિસ્થિતિઓમાં હાઇડ્રોલાઇઝ કરવા સક્ષમ છે. તેથી, એમીલેઝ પ્રવૃત્તિ 320 છે.

^ 4.2 લેબોરેટરી કાર્ય "કેટલેઝ પ્રવૃત્તિનું નિર્ધારણ

બેચ અનુસાર"

આ પદ્ધતિ તેના પર KMnO 4 સોલ્યુશનને ટાઇટ્રેટ કરીને તેના પર કેટાલેઝની ક્રિયા પછી બાકી રહેલા હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડની માત્રા નક્કી કરવા પર આધારિત છે. પ્રતિક્રિયા સમીકરણ અનુસાર આગળ વધે છે

0.1 mol/l પોટેશિયમ પરમેંગેનેટ સોલ્યુશનનું 1 મિલી હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડના 85 મિલિગ્રામને અનુરૂપ છે.

^ સામગ્રી અને રીએજન્ટ્સ: કેટાલેઝ તૈયારી (1 ગ્રામ જવના માલ્ટ સ્પ્રાઉટ્સને પોર્સેલેઇન મોર્ટારમાં 6 મિલી ફોસ્ફેટ બફર સાથે પીસીને ફિલ્ટર કરવામાં આવે છે); H 2 SO 4 ના 10% ઉકેલ; ફોસ્ફેટ બફરમાં હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડનું 0.1% સોલ્યુશન, pH=7.0 (0.2 mol/l NaH 2 PO 4 ના 13.6 ml માં 0.2 mol/l NaH 2 PO 4 નું 35.0 ml); 0.1 mol/l KMnO 4 સોલ્યુશન.

સાધન: 100 મિલી ફ્લાસ્ક, પિપેટ્સ, બ્યુરેટ્સ, થર્મોસ્ટેટ.

^ કામની પ્રગતિ.બે ફ્લાસ્કમાં 2 મિલી કેટાલેઝ તૈયારી ઉમેરો, તેમાંથી એક (નમૂના) માં 10% H2SO4 સોલ્યુશનનું 1 મિલી ઉમેરો, પછી દરેક ફ્લાસ્કમાં 2 મિલી હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડ સોલ્યુશન રેડો, થર્મોસ્ટેટમાં 40 મિનિટ માટે 38 °C પર મૂકો. . સેવનનો સમય પસાર થઈ ગયા પછી, 10% H 2 SO 4 સોલ્યુશનનું 1 મિલી બીજા ફ્લાસ્ક (નિયંત્રણ)માં ઉમેરવામાં આવે છે અને બંને સોલ્યુશનને 0.1 mol/L KMnO 4 સોલ્યુશન સાથે ટાઇટ્રેટ કરવામાં આવે છે જ્યાં સુધી વધુ પોટેશિયમમાંથી સતત ગુલાબી રંગ દેખાય નહીં. પરમેંગેનેટ

Catalase પ્રવૃત્તિ વિઘટિત હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડ (ml) ની માત્રા દ્વારા નક્કી કરવામાં આવે છે અને સૂત્રનો ઉપયોગ કરીને ગણતરી કરવામાં આવે છે:

,

જ્યાં
- 0.001 N KMnO 4 સોલ્યુશન, ml સાથે નિયંત્રણ અને પરીક્ષણ નમૂનાઓના ટાઇટ્રેશનના પરિણામોમાં તફાવત;

ક્યૂ – હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડની માત્રા (85 મિલિગ્રામ), અનુરૂપ
0.1 mol/l KMnO 4 સોલ્યુશનનું 1 મિલી.

^ 4.3 પ્રયોગશાળાનું કાર્ય “ડ્રિપ પદ્ધતિ
(ક્લિમોવ્સ્કી અને રોડઝેવિચ અનુસાર)"

એમાયલોલિટીક પ્રવૃત્તિ, મુખ્યત્વે તૈયારીમાં α-amylase ની હાજરીને કારણે, સ્ટાર્ચના હાઇડ્રોલિસિસને ઉત્પ્રેરક કરવાની એન્ઝાઇમની ક્ષમતાને આયોડિનથી ડાઘ વગરના ઉત્પાદનોમાં દર્શાવે છે. જો તૈયારીમાં α-amylase અને glucoamylase હાજર હોય, તો આ પદ્ધતિ તમામ એમાયલોલિટીક ઉત્સેચકોની કુલ અસર નક્કી કરે છે.

આ પદ્ધતિમાં, એમાયલોલિટીક પ્રવૃત્તિના એકમને એન્ઝાઇમના જથ્થા તરીકે લેવામાં આવે છે જે 1 ગ્રામ દ્રાવ્ય સ્ટાર્ચના ભંગાણને ઉત્પ્રેરક બનાવે છે જે સખત રીતે વ્યાખ્યાયિત શરતો હેઠળ 30 ડિગ્રી સેલ્સિયસ તાપમાને 1 કલાકમાં આયોડિનથી ડાઘ નથી. AS ની એમાયલોલિટીક પ્રવૃત્તિ 1 ગ્રામ દવા, સંસ્કૃતિ અથવા 1 સેમી 3 સોલ્યુશન દીઠ સૂચવેલ એકમોની સંખ્યા દ્વારા દર્શાવવામાં આવે છે. AC મૂલ્ય દર્શાવે છે કે નિર્ધારણની સ્થિતિમાં 1 કલાકમાં 1 ગ્રામ દવા, કલ્ચર અથવા 1 સેમી 3 સોલ્યુશન દ્વારા કેટલા ગ્રામ સ્ટાર્ચને આયોડિન-અનસ્ટેઈન સંયોજનોમાં હાઇડ્રોલાઇઝ કરી શકાય છે. આયોડિન પરીક્ષણનો ઉપયોગ કરીને પ્રતિક્રિયાની પૂર્ણતાનું નિરીક્ષણ કરવામાં આવે છે.

પદ્ધતિની સંવેદનશીલતા નક્કી કરવામાં આવે છે ન્યૂનતમ જથ્થોસમય કે જે દરમિયાન આયોડિન રંગમાં ફેરફાર દૃષ્ટિની રીતે શોધી શકાય છે. એવું માનવામાં આવે છે કે ઝડપ એન્ઝાઇમેટિક પ્રતિક્રિયાવપરાયેલ એન્ઝાઇમની માત્રાના સીધા પ્રમાણસર છે અને 5 મિનિટથી 1 કલાક સુધી સ્થિર રહે છે, એટલે કે, પ્રતિક્રિયા શૂન્ય-ક્રમ પ્રતિક્રિયા કાયદાનું પાલન કરે છે. વધુમાં, પીએચ મૂલ્યનો પ્રભાવ અને રાસાયણિક પ્રકૃતિ AC ની માત્રા દ્વારા બફર. એસિટેટ બફર (pH=4.7) સાથે, મશરૂમની તૈયારીઓમાં AC મૂલ્ય ફોસ્ફેટ બફર (pH=6.0) સાથે નિર્ધારિત કરતાં સરેરાશ 1.5 ગણું વધારે છે. તેથી, જ્યારે ફૂગ સંસ્કૃતિઓનું AC મૂલ્ય નક્કી કરવામાં આવે છે, ત્યારે એસિટેટ બફરનો ઉપયોગ કરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.

પદ્ધતિનો ગેરલાભ એ અસ્પષ્ટતા છે દ્રશ્ય વ્યાખ્યાપ્રતિક્રિયાનો અંત.

^ સામગ્રી અને રીએજન્ટ્સ: ફંગલ મૂળના ઉત્સેચકો માટે pH=4.7 સાથે એસિટેટ બફર; બેક્ટેરિયલ મૂળના ઉત્સેચકો માટે pH=6.0 સાથે ફોસ્ફેટ બફર; 1% સ્ટાર્ચ સોલ્યુશન (ફંગલ તૈયારીઓના વિશ્લેષણ માટે વપરાતા સ્ટાર્ચ સોલ્યુશનમાં pH = 4.7 હોવું જોઈએ, બેક્ટેરિયલ તૈયારીઓના વિશ્લેષણ માટે - 6.0); આયોડિન ઉકેલો. આયોડિનનું મૂળભૂત દ્રાવણ તૈયાર કરવા માટે, 4.4 ગ્રામ પોટેશિયમ આયોડાઇડ, 1.4 ગ્રામ મેટાલિક આયોડિનને ગ્રાઉન્ડ-ઇન ઢાંકણવાળા ટેરેડ ગ્લાસમાં તોલવામાં આવે છે, અને લગભગ 2 સેમી 3 નિસ્યંદિત પાણી ઉમેરવામાં આવે છે. કાચને ઢાંકણ વડે બંધ કરવામાં આવે છે, સમાવિષ્ટો મિશ્ર કરવામાં આવે છે અને આયોડિન ઓગળ્યા પછી, સોલ્યુશનને ગ્રાઉન્ડ-ઇન સ્ટોપર સાથે 100 સેમી 3 વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં સ્થાનાંતરિત કરવામાં આવે છે. માર્ક કરવા માટે નિસ્યંદિત પાણી સાથે વોલ્યુમ ભરો. ફ્લાસ્કની સામગ્રી ઠંડી, અંધારાવાળી જગ્યાએ સંગ્રહિત થાય છે. મૂળભૂત આયોડિન સોલ્યુશન તેની તૈયારીની તારીખથી 30 દિવસની અંદર વાપરી શકાય છે. મુખ્ય દ્રાવણમાંથી આયોડિનનું કાર્યકારી દ્રાવણ તૈયાર કરવામાં આવે છે. આ કરવા માટે, 100 સેમી 3 ની ક્ષમતાવાળા વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં મૂળભૂત આયોડિન સોલ્યુશનનો 20 સેમી 3 રેડવામાં આવે છે, 4.4 ગ્રામ પોટેશિયમ આયોડાઇડ ઉમેરવામાં આવે છે અને સોલ્યુશનની કુલ માત્રા 100 સેમી 3 પર ગોઠવવામાં આવે છે. આયોડિન વર્કિંગ સોલ્યુશન તેની તૈયારી પછી છ દિવસની અંદર ખાઈ શકાય છે.

સાધન:પહોળી ટેસ્ટ ટ્યુબ, કાચના સળિયા, પીપેટ, 50 મિલી બીકર, પેટ્રી ડીશ, થર્મોસ્ટેટ.

^ કામની પ્રગતિ. AC મૂલ્ય નક્કી કરવા માટે, પ્રતિક્રિયાની પરિસ્થિતિઓનું સખતપણે નિરીક્ષણ કરવું મહત્વપૂર્ણ છે. આ કરવા માટે, બધા ઉકેલો - સબસ્ટ્રેટ (1% સ્ટાર્ચ સોલ્યુશન), એન્ઝાઇમ સોલ્યુશન અને નિસ્યંદિત પાણીને પહેલા 30 ° સે તાપમાને ગરમ કરવું આવશ્યક છે.

25 સેમી 3 (12.5 મિલી) ની માત્રામાં સબસ્ટ્રેટને વિશાળ ટેસ્ટ ટ્યુબમાં મૂકવામાં આવે છે જેમાં કાચની સળિયા નાખવામાં આવે છે. 30 સેમી 3 (15 મિલી) અર્ક અને 30 સેમી 3 (15 મિલી) પાણી અલગ ટેસ્ટ ટ્યુબમાં રેડવામાં આવે છે, થર્મોસ્ટેટમાં મૂકવામાં આવે છે અને તેને 30 ºС તાપમાને રાખવામાં આવે છે.
10 મિનિટ.

પછી, પાઇપેટનો ઉપયોગ કરીને, થર્મોસ્ટેટમાંથી ટેસ્ટ ટ્યુબને દૂર કર્યા વિના, મૂળ એન્ઝાઇમ સોલ્યુશનના 1 થી 25 સેમી 3 સુધી અને સ્ટાર્ચના દ્રાવણમાં અનુરૂપ પાણીનો જથ્થો ઉમેરો, જેથી પ્રતિક્રિયાની કુલ માત્રા મિશ્રણ 50 સેમી 3 છે. જો એન્ઝાઇમનો અર્ક નિષ્ક્રિય હોય, તો તમે તેમાં ફક્ત 25 સેમી 3 ઉમેરી શકો છો, અને પાણી બિલકુલ ઉમેરી શકતા નથી.

ટેસ્ટ ટ્યુબની સામગ્રીને લાકડી સાથે મિશ્રિત કરવામાં આવે છે અને સ્ટાર્ચ સોલ્યુશનમાં અર્ક ઉમેરવામાં આવે ત્યારે સ્ટોપવોચ સાથે સમયની નોંધ લેવામાં આવે છે. દર 60 સેકન્ડે, થર્મોસ્ટેટમાંથી તેને દૂર કર્યા વિના ટેસ્ટ ટ્યુબમાંથી નમૂનાનું એક ટીપું લેવામાં આવે છે. સફેદ પોર્સેલેઇન પ્લેટ પર ડ્રોપ મૂકવામાં આવે છે, આ ડ્રોપને આયોડિન વર્કિંગ સોલ્યુશનના ડ્રોપ સાથે જોડવામાં આવે છે અને રંગ જોવા મળે છે. જ્યારે પ્રથમ 10 સેકન્ડમાં ટેસ્ટ સોલ્યુશનના ડ્રોપ સાથે જોડવામાં આવે ત્યારે આયોડિન હવે રંગમાં ફેરફાર કરતું નથી ત્યારે સ્ટાર્ચ બ્રેકડાઉન પ્રતિક્રિયા પૂર્ણ માનવામાં આવે છે. રંગ પરિવર્તન બે ટીપાં - આયોડિન અને પ્રતિક્રિયા મિશ્રણ વચ્ચેના સંપર્કની સરહદ પર સ્પષ્ટપણે દેખાય છે.

આયોડિનથી ડાઘ ન હોય તેવા ઉત્પાદનોમાં સ્ટાર્ચને વિભાજીત કરવામાં જે સમય લાગે છે તે 10 થી રેન્જમાં હોવો જોઈએ.
20 મિનિટ.

જો હાઇડ્રોલિસિસનો સમય 10 મિનિટથી ઓછો હોય, તો હાઇડ્રોલિસિસ માટે ઓછા અર્કનો ઉપયોગ કરીને નિર્ધારણનું પુનરાવર્તન કરવામાં આવે છે અને વધુ પાણી. જો હાઇડ્રોલિસિસ 20 મિનિટની અંદર પૂર્ણ ન થાય, તો વિશ્લેષણ પણ પુનરાવર્તિત થાય છે, વધુ એન્ઝાઇમ અર્ક અને નિર્ધારણ માટે ઓછું પાણી લે છે. એન્ઝાઇમના અર્કની માત્રા કે જેને પુનઃ-વિશ્લેષણ માટે લેવાની જરૂર છે તે મેળવેલ હાઇડ્રોલિસિસ સમયને ધ્યાનમાં રાખીને ગણવામાં આવે છે.

જો એન્ઝાઇમના અર્કમાં થોડું અથવા વધારે હોય ઉચ્ચ પ્રવૃત્તિ, અને 1 થી 25 સેમી 3 સુધીના એન્ઝાઇમ સોલ્યુશનની માત્રા 10...20 મિનિટ માટે સ્ટાર્ચ હાઇડ્રોલિસિસની અવધિની ખાતરી કરતી નથી, પછી વિશ્લેષણ માટે તેઓ 25 સેમી 3 સ્ટાર્ચ સોલ્યુશન લે છે નહીં, પરંતુ મોટી અથવા નાની રકમ લે છે. ઉદાહરણ તરીકે, 10 અથવા 40 cm 3, અનુરૂપ સુધારો ઉમેરીને ગણતરી સૂત્ર(0.1 અથવા 0.4, અનુક્રમે, સામાન્ય 0.25 ને બદલે).

AS (એકમો/જી) ની એમાયલોલિટીક પ્રવૃત્તિનું મૂલ્ય સૂત્રનો ઉપયોગ કરીને ગણવામાં આવે છે:

જ્યાં 0.25 એ સ્ટાર્ચનો જથ્થો છે જે 1% દ્રાવણના 25 સેમી 3 માં છે, g;

60 - 1 કલાક માટે રૂપાંતરણ પરિબળ;

N એ પ્રતિક્રિયામાં ભાગ લેતા એન્ઝાઇમની માત્રા છે, g અથવા cm 3 (આ મૂલ્ય પ્રારંભિક અર્કની સાંદ્રતા અને અનુગામી મંદનને ધ્યાનમાં રાખીને નક્કી કરવામાં આવે છે);

ટી – તે સમય કે જે દરમિયાન સ્ટાર્ચને આયોડિનથી રંગાયેલા ન હોય તેવા ઉત્પાદનોમાં વિભાજિત કરવામાં આવે છે, મિનિટ.

ઉદાહરણ.પૃથ્થકરણ માટે ફૂગના એર કલ્ચરનો એન્ઝાઈમેટિક અર્ક લેવામાં આવ્યો હતો. બફર કરેલા પાણીના 100 સેમી 3 માં 5 ગ્રામ કલ્ચરના દરે સ્ટોક સોલ્યુશન તૈયાર કરવામાં આવ્યું હતું. તે જાણીતું છે આ સંસ્કૃતિખૂબ જ સક્રિય છે, તેથી મૂળ દ્રાવણનું વધારાનું મંદન કરવામાં આવ્યું હતું: 20 સેમી 3 વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં નિસ્યંદિત પાણી સાથે 50 સેમી 3 સુધી લાવવામાં આવ્યું હતું અને ત્યાંથી 2 સેમી 3 વિશ્લેષણ માટે લેવામાં આવ્યું હતું, એટલે કે. નીચેનો મંદન ક્રમ પ્રાપ્ત થયો હતો:

5 ગ્રામ → 100 સેમી 3 → 20 સેમી 3 → 50 સેમી 3 → 2 સેમી 3.

છેલ્લા મંદન (2 cm 3) ના એન્ઝાઇમ દ્રાવણ સાથે 0.25 સ્ટાર્ચ (1% સ્ટાર્ચ દ્રાવણના 25 cm 3) ને હાઈડ્રોલાઈઝ કરવામાં 12 મિનિટ લાગી. પછી હવામાં સૂકા પાક (યુનિટ/જી)નું AC હશે:

એન્ઝાઇમેટિક પ્રવૃત્તિની પુનઃગણતરી કરતી વખતે, એન્ઝાઇમની તૈયારીના એકદમ શુષ્ક પદાર્થને ધ્યાનમાં લેવું જોઈએ નહીં, પરંતુ ભેજને ધ્યાનમાં લેવું જોઈએ. સૂત્રનો ઉપયોગ કરીને ગણતરી કરવી જોઈએ:

,

જ્યાં W એ સંસ્કૃતિ અથવા તૈયારીની ભેજ સામગ્રી છે.

^ 4.4 લેબોરેટરી વર્ક “વિલસ્ટેટર પદ્ધતિ
અને પ્રોટીઓલિટીકની વોલ્ડસ્ચમિટ-લીટ્ઝ વ્યાખ્યા
ફેરફારમાં એન્ઝાઇમ પ્રવૃત્તિ"

પદ્ધતિ એમિનો એસિડ અને પોલિપેપ્ટાઇડ્સના આલ્કોહોલ સોલ્યુશનમાં મુક્ત કાર્બોક્સિલ જૂથોના નિર્ધારણ પર આધારિત છે.

પ્રવૃત્તિ (PA) એ એમાઇન નાઇટ્રોજનના મિલિગ્રામની સંખ્યા દ્વારા વ્યક્ત કરવામાં આવે છે જે 5% જિલેટીન દ્રાવણની ચોક્કસ માત્રાના હાઇડ્રોલિસિસ દરમિયાન 7.3 થી 7.5 1 ગ્રામ દવાના pH મૂલ્ય સાથે અથવા એન્ઝાઇમ દ્રાવણના 1 સે.મી. 40 ºC ના તાપમાને 1 કલાક.

પ્રોટીઓલિટીક પ્રવૃત્તિના એકમને એન્ઝાઇમની માત્રા તરીકે લેવામાં આવે છે જે સ્વીકૃત પ્રાયોગિક પરિસ્થિતિઓ હેઠળ 1 કલાકમાં 1 મિલિગ્રામ એમાઇન નાઇટ્રોજન ઉત્પન્ન કરે છે.

^ સામગ્રી અને રીએજન્ટ્સ: 96% ઇથિલ આલ્કોહોલ; thymolphthalein ના 1% ઉકેલ; 0.1 એન NaOH સોલ્યુશન; સબસ્ટ્રેટ - 5% જિલેટીન સોલ્યુશન; વિશ્લેષણ કરેલ છોડમાંથી અર્ક.

પ્રોટીઓલિટીક પ્રવૃત્તિ નક્કી કરવા માટે અર્કની તૈયારી: 0.25 ગ્રામ છોડની સામગ્રીનો નમૂનો પોર્સેલેઇન મોર્ટારમાં અને 2.5 મિલી ફોસ્ફેટ બફર (pH = 7.3) સાથે 2.5 મિનિટ માટે જમીનમાં મૂકવામાં આવે છે, પછી માસ ફિલ્ટર કરવામાં આવે છે.

5% જિલેટીન સોલ્યુશન (સબસ્ટ્રેટ) ની તૈયારી: 5 ગ્રામ જિલેટીનને એક ગ્લાસ કપમાં 15...20 સેમી 3 નિસ્યંદિત પાણીમાં 20...30 મિનિટ માટે પહેલાથી પલાળવામાં આવે છે. સોજોવાળા પ્રોટીનને 70 થી 80 ° સે તાપમાને બફર સોલ્યુશનના 20...25 સેમી 3 માં રેડવામાં આવે છે અને કાચની સળિયા સાથે સારી રીતે મિશ્રિત કરવામાં આવે છે. ઓગળેલા ભાગને 100 સેમી 3 વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં રેડવામાં આવે છે, અન્ય 20...25 સેમી 3 બફર સોલ્યુશન વણ ઓગળેલા ભાગમાં ઉમેરવામાં આવે છે, અને પરિણામી સોલ્યુશન ફરીથી તે જ ફ્લાસ્કમાં સ્થાનાંતરિત થાય છે. 40 °C સુધી ઠંડુ કરાયેલ જિલેટીન સોલ્યુશનને સમાન તાપમાનના બફર સોલ્યુશન સાથે ચિહ્ન પર લાવવામાં આવે છે. તૈયાર જિલેટીન સોલ્યુશન રેફ્રિજરેટરમાં 2 થી 5 ° સે તાપમાને સંગ્રહિત થાય છે અને બે દિવસમાં વિશ્લેષણ માટે ઉપયોગમાં લેવાય છે. વિશ્લેષણ પહેલાં, જિલેટીન સોલ્યુશનને પાણીના સ્નાનમાં 40 ° સે તાપમાને ગરમ કરવામાં આવે છે.

સાધન: 200 થી 250 ml ના વોલ્યુમ સાથે શંકુ આકારના ફ્લાસ્ક, 50 ml ના વોલ્યુમ સાથે વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્ક, કાચની સળિયા, પિપેટ્સ, બ્યુરેટ્સ, થર્મોસ્ટેટ.

^ કામની પ્રગતિ. 7.3 થી 7.5 સુધીના pH મૂલ્યવાળા જિલેટીનના 5% દ્રાવણના 10 સેમી 3 માં, પરીક્ષણ એન્ઝાઇમ દ્રાવણમાં 2 સેમી 3 ઉમેરો અને તરત જ પ્રતિક્રિયા મિશ્રણના 1 સેમી 3 ને 50 થી 100 ની ક્ષમતાવાળા શંકુ આકારના ફ્લાસ્કમાં લો. cm 3, જ્યાં રેડવું 20 cm 3 96% ઇથિલ આલ્કોહોલઅને 0.2 cm 3 1% thymolphthalein. વાદળી રંગ દેખાય ત્યાં સુધી નમૂનાને 0.1 N NaOH સોલ્યુશન સાથે ટાઇટ્રેટ કરવામાં આવે છે.

એન્ઝાઇમ સોલ્યુશન સાથેના બાકીના જિલેટીન મિશ્રણને હાઇડ્રોલિસિસ માટે 40 ºC તાપમાન સાથે થર્મોસ્ટેટમાં મૂકવામાં આવે છે. 3 કલાક પછી, પ્રતિક્રિયા મિશ્રણનો 1 સેમી 3 50 થી 100 સેમી 3 ની ક્ષમતાવાળા બીજા ફ્લાસ્કમાં લેવામાં આવે છે, જેમાં 96% એથિલ આલ્કોહોલનું 20 સેમી 3 અને 1% થાઈમોલ્ફથાલિનનું 0.2 સેમી 3 પ્રથમ રેડવામાં આવે છે. કંટ્રોલ વેરિઅન્ટના કિસ્સામાં સેમ્પલ ટાઇટેડ છે.

પીએસની પ્રોટીઓલિટીક પ્રવૃત્તિની ગણતરી સૂત્રનો ઉપયોગ કરીને હાથ ધરવામાં આવે છે:

,

જ્યાં A એ પ્રતિક્રિયા માધ્યમમાંથી પ્રયોગ દરમિયાન સંચિત એમાઈન નાઈટ્રોજનની માત્રા છે, ml;

ટી - પ્રોટીઓલિસિસની અવધિ, h;

P એ એક ગુણાંક છે જે 1 ગ્રામ દવા અથવા પ્રવાહી એન્ઝાઇમ દ્રાવણના 1 સેમી 3 માં મંદન અને રૂપાંતરને ધ્યાનમાં લે છે.

મૂલ્ય A ની ગણતરી સૂત્રનો ઉપયોગ કરીને કરવામાં આવે છે:

,

જ્યાં a પ્રાયોગિક નમૂનાના 1 સેમી 3 ના ટાઇટ્રેશન માટે વપરાયેલ 0.1 N NaOH દ્રાવણની માત્રા છે, cm 3;

અને - નિયંત્રણ નમૂના માટે સમાન;

1.4 – એમિનો એસિડ અને પોલિપેપ્ટાઇડ્સના નાઇટ્રોજનના મિલિગ્રામમાં 0.1 N આલ્કલી દ્રાવણની માત્રાનું રૂપાંતર પરિબળ;

K - આલ્કલી ટાઇટરમાં કરેક્શન.

લેબોરેટરી વર્ક નંબર 1

કોષમાં પ્રતિક્રિયાઓને વેગ આપવા માટે એન્ઝાઇમ્સની ભૂમિકા

(કેટલાઝ પ્રવૃત્તિની તપાસ)

લક્ષ્ય:છોડ અને પ્રાણી કોષોમાં કેટાલેઝ એન્ઝાઇમની ક્રિયા શોધો, કુદરતી અને ઉકળતા-ક્ષતિગ્રસ્ત કોષોની એન્ઝાઇમેટિક પ્રવૃત્તિની તુલના કરો.

સાધનસામગ્રી: 3% હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડ સોલ્યુશન, કાચા અને બાફેલા બટાકાના ટુકડા અને માંસ (લિવર, ફેફસાં), ટેસ્ટ ટ્યુબ.

કેટાલેઝ પ્રવૃત્તિની તપાસ

કેટાલેઝ એ એન્ઝાઇમ છે જે હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડના વિઘટનને ઉત્પ્રેરક બનાવે છે. મોલેક્યુલર ઓક્સિજન, ગેસ પરપોટાના સ્વરૂપમાં પ્રકાશિત થાય છે:

catalase

2 H 2 O 2 _ → 2H 2 O + O 2

હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડ કેટલાક છોડ અને પ્રાણીઓના કોષોમાં રેડોક્સ પ્રતિક્રિયાઓના આડપેદાશ તરીકે ઉત્પન્ન થાય છે. આ સંયોજન કોષો માટે ઝેરી છે, અને કેટાલેઝ તેના અસરકારક નિરાકરણની ખાતરી કરે છે. કેટાલેઝ એ સૌથી ઝડપી કામ કરતા ઉત્સેચકોમાંનું એક છે: કેટાલેઝનો એક પરમાણુ એક સેકન્ડમાં હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડના 200,000 અણુઓ સુધી વિઘટન કરે છે. કેટાલેઝ કોશિકાઓના મેમ્બ્રેન વેસિકલ્સ - માઇક્રોબોડીઝ અને પેરોક્સિસોમ્સમાં સ્થાનીકૃત છે.

કામમાં પ્રગતિ

4 સ્વચ્છ ટેસ્ટ ટ્યુબ લો અને તેમાંથી પ્રથમમાં થોડી માત્રામાં બારીક છીણેલા બટાકા મૂકો, બીજામાં - થોડા બાફેલા બટાકા, ત્રીજામાં - માંસના બારીક સમારેલા ટુકડા (લિવર, ફેફસા), ચોથા ભાગમાં - થોડા ઝીણા સમારેલા. બાફેલું માંસ. દરેક ટેસ્ટ ટ્યુબમાં 3-4 મિલી ઉમેરો. 3% હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડ સોલ્યુશન. ટેસ્ટ ટ્યુબમાં શું થાય છે તેનું અવલોકન કરો. કોષ્ટકમાં નિરીક્ષણ પરિણામો રેકોર્ડ કરો.

કુદરતી અને ક્ષતિગ્રસ્ત કોષોની એન્ઝાઇમેટિક પ્રવૃત્તિ

તમારા પરિણામો સમજાવો. જીવંત અને મૃત કોષોમાં કેટાલેઝની ઉત્પ્રેરક પ્રવૃત્તિ વિશે નિષ્કર્ષ દોરો.

નિષ્કર્ષ: ________

_______________

_______________

_____________

સુરક્ષા પ્રશ્નો:

1. ઉત્સેચકો શું છે? પ્રોટીનની કઈ રચના તેમની પ્રવૃત્તિ બનાવે છે?

2. ઉત્સેચકોમાં કયા ગુણધર્મો હોય છે?______

3. શું કહેવાય છે સક્રિય કેન્દ્રએન્ઝાઇમ? એન્ઝાઇમમાં આવા કેટલા કેન્દ્રો હોઈ શકે?_

4. ઉત્સેચકો રાસાયણિક પ્રતિક્રિયાઓને કેવી રીતે ઝડપી બનાવે છે? ___________________________

5. *આલ્કોહોલ, ફિનોલ, ક્લોરામાઇન અને અન્ય એન્ટિસેપ્ટિક્સનો ઉપયોગ પેથોજેનિક ફ્લોરાથી દૂષિત શરીરના વિસ્તારોની સારવાર માટે દવામાં થાય છે. શા માટે સમજાવો._____

ગ્રા.___3

લેબોરેટરી વર્ક નંબર 2

કાર્બનિક પદાર્થોની શોધ

લક્ષ્ય:પેશીઓમાં કાર્બનિક પદાર્થો (સ્ટાર્ચ, પ્રોટીન, ચરબી) ઓળખો અને તેમના ગુણધર્મોનો અભ્યાસ કરો.

સાધન:જાળીની થેલી, ઘઉંના દાણા (ઘઉંનો લોટ), 5% આયોડિન દ્રાવણ, સૂર્યમુખીના બીજ (અથવા અન્ય કોઈપણ તેલીબિયાં પાક: કપાસ, શણ, મગફળી, સોયાબીન વગેરે).

કાર્બનિક સંયોજનો- કાર્બન ધરાવતા પદાર્થો, જીવંત પ્રકૃતિની લાક્ષણિકતા, જીવંત જીવોના કોષોના સમૂહના સરેરાશ 20-30% છે. કોષો અને સજીવોના મુખ્ય ગુણધર્મો દ્વારા નક્કી કરવામાં આવે છે કાર્બનિક પોલિમર: પ્રોટીન, કાર્બોહાઇડ્રેટ્સ, ન્યુક્લિક એસિડ, તેમજ જટિલ જોડાણો- ચરબી અને હોર્મોન્સના અસંખ્ય અણુઓ, રંગદ્રવ્યો, વ્યક્તિગત ન્યુક્લિયોટાઇડ્સ, ખાસ કરીને એટીપી. ઉપરાંત કાર્બનિક પદાર્થકોષો સમાવે છે ખનિજોઅને પાણી, પરંતુ કાર્બનિક પદાર્થોની સામગ્રી હંમેશા વધારે હોય છે. કાર્બનિક પદાર્થોની માત્રા અલગ અલગ હોઈ શકે છે.

પ્રોટીન -અનિયમિત, અથવા માહિતીપ્રદ, પોલિમર જેના મોનોમર્સ એમિનો એસિડ છે.

તેમની રચનાના આધારે, પ્રોટીનને વિભાજિત કરવામાં આવે છે:

- સરળ- માત્ર એમિનો એસિડનો સમાવેશ થાય છે. ઉદાહરણ તરીકે, છોડના પ્રોટીન પ્રોલામિન્સ છે, તે અનાજના બીજના ગ્લુટેનમાં સમાયેલ છે અને પાણીમાં ઓગળતા નથી;

- જટિલ- એમિનો એસિડ ઉપરાંત, તેમાં અન્ય કાર્બનિક સંયોજનો (ન્યુક્લિક એસિડ, લિપિડ્સ, કાર્બોહાઇડ્રેટ્સ), ફોસ્ફરસ સંયોજનો અને ધાતુઓ હોય છે. તદનુસાર, તેમને કહેવામાં આવે છે: ન્યુક્લિયોપ્રોટીન, લિપોપ્રોટીન, ગ્લાયકોપ્રોટીન, ફોસ્ફો- અને મેટાલોપ્રોટીન.

કાર્બોહાઇડ્રેટ્સ -કાર્બન, હાઇડ્રોજન અને ઓક્સિજન ધરાવતા સંયોજનો. તેઓ મોનો-, ડાય- અને પોલિસેકરાઇડ્સમાં વહેંચાયેલા છે. પોલિસેકરાઇડ્સ ઉચ્ચ પરમાણુ વજનવાળા કાર્બોહાઇડ્રેટ્સ ધરાવે છે મોટી સંખ્યામાંમોનોસેકરાઇડ્સ, તેમના પરમાણુ વજનમોટી છે, પરમાણુઓ રેખીય અથવા ડાળીઓવાળું માળખું ધરાવે છે. કાર્યાત્મક દ્રષ્ટિએ, અનામત અને માળખાકીય હેતુઓ માટે પોલિસેકરાઇડ્સને અલગ પાડવામાં આવે છે. પાણીમાં અદ્રાવ્ય સ્ટાર્ચ- મુખ્ય અનામત પોલિસેકરાઇડ છોડના કોષો(પોલિમર ά - ગ્લુકોઝ); જ્યારે આયોડિનના સંપર્કમાં આવે છે ત્યારે તે વાદળી થઈ જાય છે; માં સમાયેલ છે મોટી માત્રામાંબટાકાના કંદ, ફળો, બીજમાં. ગ્લાયકોજેન- માનવ અને પ્રાણીઓના શરીરના પેશીઓમાં, તેમજ મશરૂમ્સ અને યીસ્ટમાં જોવા મળતું પોલિસેકરાઇડ, - નાટકો મહત્વપૂર્ણ ભૂમિકાકોષોમાં કાર્બોહાઇડ્રેટ્સના પરિવર્તનમાં. ફાઇબર (સેલ્યુલોઝ)- મુખ્ય માળખાકીય પોલિસેકરાઇડ કોષ પટલછોડ

લિપિડ્સ અને લિપિડ્સ– ચરબી અને ચરબી જેવા પદાર્થો – સાથે કાર્બનિક સંયોજનો અલગ માળખું. તેઓ પાણીમાં ઓગળતા નથી, પરંતુ સારી રીતે ઓગળી જાય છે કાર્બનિક સંયોજનો: ઈથર, ગેસોલિન, ક્લોરોફોર્મ, વગેરે.

દ્વારા રાસાયણિક માળખુંલિપિડ્સ - ગ્લિસરોલના સંયોજનો - ટ્રાઇહાઇડ્રિક આલ્કોહોલ - ઉચ્ચ પરમાણુ વજનવાળા કાર્બનિક એસિડ્સ (ફેટી) સાથે, પોલિમર માળખું નથી.

બીજ રચના

(A.N. Bach અને A.I. Oparin અનુસાર)

શરીરના મહત્વપૂર્ણ કાર્યોનો આધાર બનાવે છે તે તમામ વિવિધ પરિવર્તનો જૈવિક ઉત્પ્રેરક - ઉત્સેચકોની ભાગીદારી સાથે થાય છે, જે ચોક્કસ પ્રોટીન છે.

ઉત્સેચકોનો આભાર, જીવંત કોષોની એક નોંધપાત્ર વિશેષતા પોતાને પ્રગટ કરે છે - ખૂબ જ જટિલ પ્રતિક્રિયાઓ હાથ ધરવાની ક્ષમતા ટૂંકા સમયઅને પ્રમાણમાં ઓછા શરીરના તાપમાને. જૈવિક મહત્વઆ ઘટના ખૂબ જ મહાન છે.

ઉત્સેચકોની ક્રિયાનો અભ્યાસ કરવા માટે, તેમને જીવંત પેશીઓથી અલગ પાડવું જરૂરી છે. સામાન્ય રીતે, આ હેતુ માટે આ એન્ઝાઇમથી સમૃદ્ધ સરળતાથી ઉપલબ્ધ સ્ત્રોત પસંદ કરવામાં આવે છે. એન્ઝાઇમને દ્રાવણમાં સ્થાનાંતરિત કરવા માટે, કોષની દિવાલોનો નાશ કરવો જરૂરી છે, જે હોમોજેનાઇઝરનો ઉપયોગ કરીને પ્રાપ્ત થાય છે, મોર્ટાર અને પેસ્ટલમાં ગ્રાઇન્ડીંગ, ઠંડું અને પીગળવું, ઓટોલિસિસ વગેરે. સામાન્ય રીતે, કોષની દિવાલોનો વિનાશ હાથ ધરવામાં આવે છે. નીચા તાપમાને, જેના કારણે બધી એન્ઝાઇમેટિક પ્રક્રિયાઓ પેશીઓમાં સ્થગિત થાય છે.

રેડોક્સ ઉત્સેચકોના જૂથમાં હેમ ધરાવતા એન્ઝાઇમનો સમાવેશ થાય છે catalase, જે મોલેક્યુલર ઓક્સિજનના પ્રકાશન સાથે હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડની વિઘટન પ્રતિક્રિયાને ઉત્પ્રેરિત કરે છે:

2 H 2 O 2 -- > 2 H 2 O + O 2

કેટાલેઝ જીવંત જીવના મોટાભાગના પેશીઓમાં જોવા મળે છે.

પદ્ધતિનો સિદ્ધાંત.

હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડ કેટાલેઝ દ્વારા વિઘટિત થાય છે. વધારાનું હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડ એસિડિક માધ્યમમાં પોટેશિયમ પરમેંગેનેટ સાથે ટાઇટ્રેટેડ છે. પ્રતિક્રિયા આવી રહી છેસમીકરણ અનુસાર:

2 KMnO 4 + 5 H 2 O 2 + 3 H 2 SO 4 -- > 2 MnSO 4 + K 2 SO 4 + 8 H 2 O + 5 O 2

પ્રયોગમાં, બાકીના અવિનાશિત હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડની માત્રા નક્કી કરવામાં આવે છે, નિયંત્રણમાં - કુલ જથ્થોલેવાયેલ હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડ (નિયંત્રણ નમૂનામાં કેટાલેઝ ઉકાળીને નિષ્ક્રિય કરવામાં આવ્યું હતું).

નિયંત્રણ પરિણામોમાંથી પ્રાયોગિક પરિણામોને બાદ કરીને, અમે ચોક્કસ સમયગાળામાં નાશ પામેલા હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડની માત્રા શોધીએ છીએ, જે અમને કેટાલેઝની પ્રવૃત્તિનો નિર્ણય કરવાની મંજૂરી આપે છે.

સાધન: 1. 50 અને 100 મિલી (1 પીસી. દરેક) માટે સીધા બ્યુરેટ

2. 10 મિલી સિલિન્ડર

3. મોર્ટાર અને પેસ્ટલ

4. શંક્વાકાર ફ્લાસ્ક 200-250 મિલી (2 પીસી.)

5. વજન સાથે તકનીકી ભીંગડા

6. 10 મિલી પીપેટ "એન્ઝાઇમ અર્ક"

7. પીપેટ "H 2 SO 4"

8. ઉકળતા પાણીનું સ્નાન

9. સ્પેટુલા

10. 100 મિલી વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્ક

11. ફનલ

12. ફિલ્ટર પેપર

સામગ્રી: 1. તાજા છોડની સામગ્રી (ગાજર અથવા બટાકા)

H 2 O 2 નું 2. 0.1 N દ્રાવણ

3. KMnO4 નો 0.1 N ઉકેલ

4. H 2 SO 4 નું 10% સોલ્યુશન

5. CaCO 3 (ક્રિસ્ટલ)

6. ક્વાર્ટઝ રેતી

કાર્ય પ્રગતિ:

2 ગ્રામ કાચા બટાકા (અથવા ગાજર)ને મોર્ટારમાં ક્વાર્ટઝ રેતીથી પીસવામાં આવે છે, ધીમે ધીમે 2-3 મિલી પાણી ઉમેરે છે. એસિડ પ્રતિક્રિયા ઘટાડવા માટે, પરપોટા બંધ ન થાય ત્યાં સુધી સ્પેટુલાની ટોચ પર કેલ્શિયમ કાર્બોનેટ ઉમેરો. કાર્બન ડાયોક્સાઇડ. ગ્રાઉન્ડ માસને જથ્થાત્મક રીતે વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં સ્થાનાંતરિત કરવામાં આવે છે અને પાણી સાથે 100 મિલી સુધી ગોઠવવામાં આવે છે. મિશ્રણને 30-60 મિનિટ માટે ઊભા રહેવા માટે છોડી દેવામાં આવે છે, ત્યારબાદ તેને ફિલ્ટર કરવામાં આવે છે.

200 મિલી શંકુ આકારના ફ્લાસ્કમાં, બ્યુરેટમાંથી 0.1 એન હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડ દ્રાવણનું 25 મિલી લો અને તેમાં 20 મિલી એન્ઝાઇમનો અર્ક પીપેટ વડે ઉમેરો. 30 મિનિટ પછી, સલ્ફ્યુરિક એસિડના 10% દ્રાવણમાં 5 મિલી ઉમેરીને એન્ઝાઇમની ક્રિયા બંધ કરવામાં આવે છે અને મિશ્રણને પોટેશિયમ પરમેંગેનેટના 0.1 N દ્રાવણ સાથે ટાઇટ્રેટ કરવામાં આવે છે (જ્યાં સુધી ગુલાબી રંગ ન બને ત્યાં સુધી જે લગભગ 1 મિનિટ માટે સ્થિર હોય છે. ). બાકીના હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડને ટાઇટ્રેટ કરવા માટે વપરાતા પોટેશિયમ પરમેંગેનેટ સોલ્યુશનના મિલીલીટરની સંખ્યા નોંધવામાં આવે છે.

તે જ સમયે, એન્ઝાઇમ સોલ્યુશન (20 મિલી) સાથે 5 મિનિટ માટે ઉકળતા પાણીના સ્નાનમાં નિષ્ક્રિય ગરમી સાથે નિયંત્રણ સેટ કરવામાં આવે છે, આ દ્રાવણમાં 0.1 એન હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડ સોલ્યુશનનું 25 મિલી ઉમેરવામાં આવે છે. મિશ્રણને 30 મિનિટ સુધી રહેવા માટે છોડી દેવામાં આવે છે, ત્યારબાદ 10% સલ્ફ્યુરિક એસિડના 5 મિલી દ્રાવણને ઉમેરવામાં આવે છે અને પોટેશિયમ પરમેંગેનેટના 0.1 N દ્રાવણ સાથે ટાઇટ્રેટ કરવામાં આવે છે. હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડના કુલ જથ્થાને ટાઇટ્રેટ કરવા માટે ઉપયોગમાં લેવાતા પોટેશિયમ પરમેંગેનેટના મિલીલીટરની સંખ્યા નોંધવામાં આવે છે.

પ્રાયોગિક અને નિયંત્રણ ટાઇટ્રેશન વચ્ચેના તફાવતમાંથી, પરમેંગેનેટનું પ્રમાણ વિઘટનિત હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડના જથ્થાની સમકક્ષ જોવા મળે છે. KMnO 4 અને H 2 O 2 વચ્ચેના પ્રતિક્રિયાના સમીકરણ મુજબ, પોટેશિયમ પરમેંગેનેટના 0.1 N દ્રાવણનું 1 મિલી હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડના 1.7 મિલિગ્રામને અનુરૂપ છે.

ગણતરીનું ઉદાહરણ.

1.25 ગ્રામ ગાજરમાંથી 100 મિલીનો કેટાલેઝ અર્ક તૈયાર કરવામાં આવ્યો હતો. પરીક્ષણ નમૂનાના ટાઇટ્રેશન માટે 15.5 મિલી જરૂરી છે, અને નિયંત્રણ નમૂના - પોટેશિયમ પરમેંગેનેટના 0.1 N દ્રાવણનું 30.2 મિલી. નમૂનામાં વિઘટિત હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડનું પ્રમાણ પોટેશિયમ પરમેંગેનેટના 0.1 N દ્રાવણના 30.2-15.5 = 14.7 મિલી જેટલું છે અને તેથી, 14.7 * 1.7 = 24.99 મિલિગ્રામ જેટલું છે.

1 ગ્રામ કાચા ગાજરમાં 30 મિનિટમાં (24.99*100)/(20*1.25) = 99.96 મિલિગ્રામ હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડ અને 1 મિનિટમાં 99.96/30 = 3.33 મિલિગ્રામ વિઘટન કરવા સક્ષમ કેટાલેઝનો જથ્થો છે. કારણ કે

હાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડનું 1 µmol 0.034 mg છે, પછી 1 ગ્રામ ગાજરમાં 33.3/0.034 = 100 U કેટાલેઝ છે.

લેબોરેટરી વર્ક નંબર 4

યીસ્ટ કોશિકાઓમાંથી સુક્રાસની તૈયારી. એન્ઝાઇમ ક્રિયાની વિશિષ્ટતા.

બધા અલગ રાસાયણિક પરિવર્તન, જે શરીરના મહત્વપૂર્ણ કાર્યોનો આધાર બનાવે છે, તે જૈવિક ઉત્પ્રેરક - ઉત્સેચકોની ભાગીદારી સાથે થાય છે, જે ચોક્કસ પ્રોટીન છે.

ઉત્સેચકો માટે આભાર, જીવંત કોષોની નોંધપાત્ર લાક્ષણિકતાઓમાંની એક પોતાને પ્રગટ કરે છે - ખૂબ જ ટૂંકા સમયમાં અને પ્રમાણમાં ઓછા શરીરના તાપમાને જટિલ પ્રતિક્રિયાઓ કરવાની ક્ષમતા.

ઉત્સેચકોના ગુણધર્મોનો અભ્યાસ, તેમની ક્રિયાની શરતો, વિવિધ અવયવો અને પેશીઓમાં ઉત્સેચકોની સામગ્રીનું નિર્ધારણ મહાન મૂલ્યમાટે સાચી સમજ જટિલ પ્રક્રિયાઓશરીરની મહત્વપૂર્ણ પ્રવૃત્તિ.

એક સૌથી મહત્વપૂર્ણ ગુણધર્મોઉત્સેચકો એ ચોક્કસ સબસ્ટ્રેટના સંબંધમાં તેમની ક્રિયાની વિશિષ્ટતા છે. ઉત્સેચકોના ઉત્પ્રેરક ગુણધર્મોની વિશિષ્ટતા એ હકીકતમાં પ્રગટ થાય છે કે એન્ઝાઇમ, એક નિયમ તરીકે, ફક્ત તેના પર કાર્ય કરે છે ચોક્કસ પદાર્થ. ઉત્સેચકોની કડક વિશિષ્ટતા એ હકીકત દ્વારા પણ સૂચવવામાં આવે છે કે સ્ટીરિયોઈસોમરિઝમના કિસ્સાઓમાં, ચોક્કસ એન્ઝાઇમ માત્ર એક સ્ટીરિયોઈસોમરના ક્લીવેજને ઉત્પ્રેરિત કરે છે. ઉત્સેચકોની વિશિષ્ટતા તેમની સૌથી મહત્વપૂર્ણ છે જૈવિક મિલકત, જેના વિના વ્યવસ્થિત ચયાપચય અશક્ય છે.

આ કાર્ય સબસ્ટ્રેટના એન્ઝાઇમ સુક્રેસ દ્વારા ક્લીવેજની પ્રક્રિયાઓની તપાસ કરે છે - સુક્રોઝ અને એન્ઝાઇમ - એમીલેઝ દ્વારા સ્ટાર્ચના ભંગાણ, જે માનવ લાળમાં જોવા મળે છે.

યીસ્ટ કોશિકાઓમાંથી સુક્રાસનું નિષ્કર્ષણ

સામગ્રી અને રીએજન્ટ્સ:

પ્રેસ્ડ યીસ્ટ - 10 ગ્રામ

હોમોજેનાઇઝર (મોર્ટાર અને પેસ્ટલ)

· ક્વાર્ટઝ રેતી

નિસ્યંદિત પાણી

કામમાં પ્રગતિ

એક મોર્ટારમાં 10 ગ્રામ ડ્રાય યીસ્ટ મૂકો, 10 મિલી નિસ્યંદિત પાણી ઉમેરો અને પોર્સેલિન મોર્ટારમાં થોડી માત્રામાં એકરૂપ બનાવો. ક્વાર્ટઝ રેતીસેલ દિવાલોનો નાશ કરવા માટે. પછી પોર્સેલિન મોર્ટારને હોમોજેનેટ સાથે 30-40 મિનિટ માટે 60 0 સે તાપમાને સૂકવવાના કેબિનેટમાં મૂકો.

નિર્દિષ્ટ સમય પછી, મોર્ટારને દૂર કરો, ઠંડુ કરો, 30 મિલી નિસ્યંદિત પાણી ઉમેરો અને મોર્ટારની સામગ્રીને સરળ થાય ત્યાં સુધી ગ્રાઇન્ડ કરો.

પછી કોષના જથ્થાને અવક્ષેપિત કરવા માટે હોમોજેનિઝેટને 15 મિનિટ માટે 3000 આરપીએમ પર સેન્ટ્રીફ્યુજ કરવામાં આવે છે. પરિણામી સુપરનેટન્ટ સુક્રેસ અર્ક છે.